18 TRYPÂNOSOMES ET TRYPANOSOMIASES 



violet foncé un peu difTérente de celle du noyau ; la membrane ondu- 

 lante reste incolore ou prend une teinte bleuâtre très pâle. Les 

 hématies sont colorées en rose, les noyaux des leucocytes en violet 

 foncé. 



Cette méthode reste, croyons-nous, la méthode de choix dans 

 tous les cas où ii y a quelque difficulté à bien faire apparaître tous 

 les détails de structure des flagellés, en particulier les flagelles. 



Mais, il existe un certain nombre de méthodes simplifiées où le 

 principe colorant du Romanowsky, qui se produit extemporanément 

 dans le procédé que nous venons de décrire, est employé tout pré- 

 paré. Nous ferons connaître deux de ces méthodes, celle de 

 Leishman et celle de Giemsa. 



La préparation de la poudre de Leishman ' nécessite les 2 solu- 

 tions suivantes : 



Solution A. — On prépare une solution de bleu de méthylène médicinal 

 (Grûbler) à 1 p. 100. On la rend alcaline en ajoutant 0,5 p. 100 de carbo- 

 nate de soude. On chauffe à 65'^ dans une étuve à paraffine pendant 

 12 heures et on laisse ensuite à la température de la chambre pendant 

 10 jours avant Tusage. 



Solution B. — On prépare une solution d'éosine BA (GrQbler) à 1 p. 1000. 



On mélange volumes égaux de la solution A et de la solution B. 



On laisse 6 à 12 heures de contact en agitant de temps en temps avec 

 une baguette de verre. On rassemble le précipité sur un filtre, on lave 

 abondamment avec l'eau distillée jusqu'à ce que l'eau de lavage soit 

 incolore ou possède seulement une teinteJégèrement bleue. 



Le meilleur dissolvant de cette nouvelle couleur est l'alcool 

 méthylique pur et anhydre. On fait une solution à 0,15 p. 100 en 

 ayant soin de broyer la poudre au mortier et de n'ajouter l'alcool 

 que par petites quantités. De cette solution, que l'on peut conserver 

 un certain temps dans un flacon bien bouché, on met 3 ou 4 gouttes 

 sur la préparation. On répartit également la matière colorante sur 

 la lame qui n'a pas besoin dêtre préalablement fixée, étant donné 

 que la couleur a pour substratum l'alcool méthylique anhydre. On 

 laisse une demi-minute, puis on met le double d'eau distillée, 6 à 

 8 gouttes, en ayant soin de bien agiter. On laisse la coloration se 

 faire, pendant 5 à 15 minutes. 



On lave et on laisse agir l'eau, distillée ou ordinaire, pour la 

 différenciation, pendant 1 minute. On sèche. 



Le colorant de Leishman se trouve dans le commerce sous forme 

 de poudre et de comprimés (soloïdes). 



La méthode de Giemsa ^ est encore plus employée que celle de 



1. Leishman, British medic. Journ., 27 sept. 1901, p. 757, et Jauni. Roy. Ariny med. 

 Corps, t. II, ilJ04, p. 069. 



2. GiEMS.x, Centralbl.f. Bakler, I, Origin., t. XXXVII, 1904, p. 308. 



