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ciques surtout et les elements accessoires, tous ces corps etanl insolubles dans Tether. 

 On traite sur le filtre par 1'acide chlorhydrique etendu qui decompose les sels calciques, 

 fournit du chlorure de calcium d'une part qui passe en solution et libere d'autre part le 

 pigment hiliaire qui se precipite, e"tant insoluble dans 1'eau pure ou saline. On lave avec 

 1'eau pour enlever le chlorure de calcium; on seche; on traite par le chloroforme qui dis- 

 sout la bilirubine. 



I A. Filtrat Solution de cholesterine dans Tether. 



, Pigment biliaire I ( Sels de chaux solubles 



Poudre de calcul I libre ou sur- I C. Filtrat. (chlorure de cal- 



digeree ) B. Residu sur filtre. tout en sels cal- ( ciumi. 



avec Tether. 

 On filtre. 



ciques. 



On lave le filtrat avec 1'acide chlor- 

 hydrique etendu. On a : ' D. Residu. 



Pigment biliaire, sur- 

 tout bilirubine. 



On lave a 1'eau : on 

 seche, et on dissout 

 avecle chloroforme. 



1 Le filtrat A contient la cholesterine melangee a des matieres grasses. On pourra 

 en eifectuer la separation, bien que ce ne soil pas necessaire si Ton veut se contenter 

 de caracteriser la cholesterine. 



Pour separer la cholesterine des graisses on se fonde sur ce que celles-ci sont sapo- 

 nifiables par les alcalis et transformees en savons solubles dans 1'eau, tandis que lacholes- 

 t6rine n'est pas modifiee (Voir n 69,</.). On evaporera done la solution etheree. On fera 

 une solution du residu dans 1'alcool a 80; on ajoutera un morceau d'alcali caustique et 

 Ton chauffera au bain-marie. On evaporera au bain-marie 1'alcool. On reprendra par 

 1'eau. La cholesterine restera en suspension dans 1'eau savonneuse. Ou ajoutera de Tether ; 

 on agile et apres repos la couche superieure decantee contiendra toute la cholesterine 

 en solution etheree. 



On repetera avec la cholesterine les reactions caracteristiques indiquees plus haul : 

 reactions microscopiques; reaction chimique de H. SCHIFF; de SALKOWSKI ; de LIBEHMANN; 

 du point de fusion. 



2 Le residu B reste sur le filtre, contient les pigments biliaires libres ou engages 

 dans des combinaisons calciques. On Ta lave a Tether pour bien le debarrasser des sub- 

 stances solubles et Ton coupe ensuite Textreme bord du filtre qui echapperait a ce lavage 

 et pourrait retenir encore un peu de cholesterine qui se serait diffusee jusque-la. On le 

 coupe en fragments : on Tajoute au residu et on lave encore a Tether. 



Puis on jette sur le liltre de Tacide chlorhydrique etendu a trois volumes, et on fait 

 repasser plusieurs fois le filtrat sur le filtre sur lequel reste le residu. 



Finalement le filtrat C contient les sels de chaux solubles et des traces de cuivre. 



3 Filtrat C. Sels de chaux solubles et truces de cuivre. On caract6rise les selsde chaux 

 par addition d'ammoniaque, d'acide acetique, d'oxalate d'ammoniaque. On caracterise 

 les sels de cuivre avec quelques gouttes de la solution de cyanoferrure de potassium qui 

 fournit un precipite de ferricyanure de cuivre qui colore en brun la liqueur. 



4 Le residu D, reste sur ftltre, est form6 de bilirubine. II est lave a Teau jusqu'a ce 

 que le filtrat ne precipite plus le nitrate d'argent (c'est-a-dire ne contienne plus d'acide 

 chlorhydrique. Le filtre est ensuite seche dans Texsiccateur, coupe au fragments. Ceux-ci 

 sont jetes dans un ballon avec un peu de chloroforme chauffe au bain-marie. La solution 

 se colore en jaune brun. On filtre. On a ainsi une solution de bilirubine dans le chloro- 

 forme. On peut la caracteriser par ses reactions : 



a. Examen microscopique des produits d' 'evaporation de la solution chloroformique. - 

 On evapore dans un verre de montre ou sur le porte-objet une petite quantite de la solu- 

 tion chloroformique. On observe a la lumiere simple ou mieux a la lumiere polarisee un 

 dep6t cristallin. Ce sont des tablettes rhombiques allongees et granulations cristallines 

 qu'il ne faut pas confondre avec des cristaux de cholesterine mal separee. On repete avec 

 ces cristaux la reaction de GMELIN. 



b. On agite avec une solution faible de carbonate de soude la solution chloroformique. 

 La couleur quitte la couche ini'6rieure de chloroforme et passe dans la couche supe- 

 rieure alcaline qui sc colore. La hiliruhine a passe a Petal de bilirubinate de soude soiu-- 



