Quantitative Bestimmung der vier Chloroplastenfarbstoffe. 15 



Chlorophyll in kolloider Form mit den Waschwassern verlorengeht. 

 Man schiittelt schwach opalisierende Abwasser unter Zusatz von etwas 

 Kochsalz mit wenig Ather und beobachtet diesen nach der Schichtung, 

 um, wenn der Ather gefarbt 1st, ihn zur Hauptmenge zuriickzugeben. 

 Nach im ganzen sechs- bis achtmaligem Waschen der atherischen Schicht 

 mit gleichen Mengen \Yasser ist das Aceton vollig entfernt, was fiir die 

 nachfolgende Verseifung notig ist, da das Chlorophyll mit Aceton bei 

 der Einwirkung von Alkali eine storende Nebenreaktion geben wiirde. 



Die atherische Losung wird mit 2 4 ccm konzentrierter methyl- 

 alkoholischer Kalilauge geschiittelt, bis nach der auftretenden braunen 

 Phase wieder die grime Farbe zuriickgekehrt ist, sodann vorsichtig mit 

 wenig Wasser versetzt ; in die alkalische Schicht geht etwas Xanthophyll 

 iiber, das man durch Umschiitteln in den Ather zuriickfiihrt. Nun ver- 

 diinnt man mit mehr Wasser und schiittelt durch, laBt die Chlorophyllin- 

 kaliumlosung in einen 25o-ccm-Me6kolben abflieBen und spiilt durch 

 ein zweites Ausschiitteln mit Wasser nach. Es kommt vor, da6 die 

 gelbe atherische Schicht noch fluoresciert, also noch unverseiftes Chloro- 

 phyll enthalt, das nur durch nochmaliges Schiitteln mit etwas Lauge 

 aus dem Ather entfernt werden kann. Die Chlorophyllinlosung (etwa 

 100 ccm": wird mit Alkohol bis zur Marke erganzt. 



Die Vergleichslosung. Entweder das sehr leicht in reinem Zu- 

 stand zu erhaltende sogenannte krystallisierte Chlorophyll, d. i. ein Ge- 

 misch der beiden Athylchlorophyllide a und im natiirlichen Verhaltnis 

 der Komponenten oder die natiirliche Phytylverbindung, das reine 

 Chlorophyll (a -f- 6), kann als Vergleichssubstanz angewandt werden. 

 Eine geeignete Konzentration fiir die Bestimmung der Extrakte normal 

 griiner Blatter wird erhalten, wenn man 0,0500 g Chlorophyll oder 

 0,0362 g (mit Zuschlag von 5 Prozent entsprechend dem Trockenverlust, 

 also 0,0380 g) Athylchlorophyllid auf ein Volumen von I 1 bringt. Zum 

 Aufbewahren dient eine konzentrierte Losung, der groBeren Haltbarkeit 

 wegen zweckmaBiger in Ather als in Alkohol 1 ), die angegebene Menge 



l ) In alkoholischer Losung tritt die als Allomerisation beschriebene Umwandlung des 

 Chlorophylls ein, bei der sich die Farbnuance etwas andert. 



