tJber das Verhalten dor Chlorophyllkohlensaureverbindung im Lichte. 425 



Die Enzympraparate diirfen clann hochstens so konzentriert angewandt 

 werden, daB die Konzentrationsanderung cles iiberschiissigen Substrates 

 die in der Versuchszeit umgesetzte Menge praktisch nicht beeinfluBt. 



Es gelingt in der Tat, durch Arbeiten mit sehr verdiinntem Hydro- 

 peroxyd auch bei gewohnlicher Temperatur die Peroxydase viel langer 

 unverandert zu halten, als fur den Versuch erforderlich ist; dies ergibt 

 sich aus folgenden Werten einer unter den spater angefiihrten Verhalt- 

 nissen vorgenommenen Bestimmung: 



Reaktionsdauer in Minuten : 5 10 20 30 45 60 

 Purpurogallinbildung in mg: 19,6 39,2 60,6 79,6 109,6 123,1 

 Das Hydroperoxyd war nach dieser Zeit aufgebraucht. Auf erneuten Zu- 

 satz ging die Purpurogallinbildung weiter. Wegen der Gefahr fur das 

 Enzym darf das Oxydationsmittel natiirlich nicht in groBem UberschuB 

 vorhanden ein. Pyrogallol hingegen wird in groBem UberschuB dar- 

 geboten, damit Konzentrationsanderungen durch seinen Verbrauch in 

 der Versuchsdauer ohne Belang sind und damit die Weiteroxydation von 

 gebildetem Purpurogallin moglichst zuriickgedrangt wird 1 ). 



Ausfiihrung der Bestimmung. Die Bedingungen der Peroxy- 

 dasebestimmung sind also: Anwendung von sehr verdiinntem Hydro- 

 peroxyd und von sehr groBem OberschuB des Pyrogallols. 



Die Reaktion wird in einem Intervall von 5 bis 10 Minuten bestimmt 

 und dann durch Ansauern mit Schwefelsaure stillgelegt ; das Purpurogallin 

 wird dann ausgeathert und colorimetrisch ermittelt. 



2,0 1 destilliertes Wasser von 20,0 , worin 5 g reinstes Pyrogallol ge- 

 lost sind, werden im Rundkolben, der sich in einem Bade von konstanter 

 Temperatur von 2O,obefindet, kraftiggeriihrt. Man tragt 2occmo,25proz. 

 saurefreies Hydroperoxyd ein und danach im Augenblick des Versuchs- 

 beginns zum Beispiel 0,25 mg Peroxydasepraparat in der Form von 



1 ) Die Purpurogallinausbeute hat in der Literatur keine geringe Kolle gespielt. Unter 

 den angegebenen Verhaltnissen betragt sie natiirlich nur cinen kleinen Bruchteil des Pyrogallols. 

 Als wir hingegen Pyrogallol in konzentrierter Losung bei Gegenwart von viel Peroxydase 

 sehr langsam mit Hydroperoxyd von niedriger Konzentration behandelten, konnten wir die 

 Ausbeute an Purpurogallin auf mehr als 80 Proz. des Pyrogallols steigern, wahrend A. Bach 

 und R. Chodat zwischen 16,2 und 16,8 Proz. des Pyrogallols an Purpurogallin erzielten 

 und A. Bach bis zu 27 Proz. (A. Bach, Ber. d. deutsch. chem. C.c-s. 47, 2125 [1914]). 



