484 METHODES SPECIALES 



d'acide osmiqiie à A p. 100, à laquelle on ajoute 1 goutte d'acide 

 acétique cristallisable par 20 gouttes. Laisser le frottis exposé 

 aux vapeurs osmiques pendant 30 à 60 secondes. 



2" temps. Fixation alcoolique. — Transférer le frottis dans 

 un bocal d'alcool absolu (fig. 245), fixer pendant 10 minutes, puis 

 sécher. 



La fixation osmio-alcoolique, suivie de la dessiccation, convient 

 surtout pour les préparations qui doivent être colorées au Roma- 

 novski. Elle a, d'après Minchin, finconvénient de lixer incomplè- 

 tement le noyau. Lorsqu'on veut colorer par un autre procédé 

 (hématoxyline, méthode de Twort), il faut faire des frottis humides 

 et les fixer au subhmé ou au Mann (p. 285). Dans ce cas, il est 

 préférable d'exécuter les frottis sur lamelle, afin de pouvoir les 

 déposer brusquement face en dessous dans le fixateur. Comme 

 Minchin le fait remarquer avec raison, les lames ne peuvent être 

 immergées facilement que par une extrémité et il en résulte tou- 

 jours des déformations dans les éléments. 



Les meilleurs fixateurs liquides sont le sublimé acétique 

 (p. 282), le sublimé alcoolique de Schaudinn (p. 283), et le 

 liquide de Mann ^ (p. 285). 



Coloration. — 1. Roman ovsky. — Minchin reconnaît que 

 cette méthode est celle qui démontre le mieux les caractères géné- 

 raux des Trypanosomes, surtout après la double fixation osmio- 

 alcoolique, suivie de la dessiccation. Mais, comme nous venons de 

 le dire, il lui reproche d'exagérer et de voiler les détails de la 

 structure nucléaire. Notons que les frottis ainsi fixés se colorent 

 beaucoup plus intensément que les frottis simplement séchés, 

 aussi faut-il surveiller attentivement la coloration, sous peine de 

 voir le cytoplasme devenir opaque. Minchin emploie le liquide de 

 Giemsa dilué dans la proportion de 1 goutte pour 1 cm^ d'eau 

 distillée (p. 408). 11 colore de 3 à 18 heures, ou moins, suivant la 

 méthode de fixation; il lave rapidement à l'eau distillée, diffé- 

 rencie quelques secondes dans le tannin-orange de Unna (Grii- 

 bler), puis lave une minute ou deux sous le robinet. On sèche ou 

 bien on déshydrate par l'acétone et on monte au baume. 



2. Bémaloxijline ferrique de Heidenhain. — Pour Minchin, 



1. Jo crois qu'on pourrait aussi employer avec avantage le Bouin et le Duboscq- 

 Brasil ; en efict, Mincliin a remarqué que le liquide de Mann, qui renferme de 

 Tacido picrique et du formol, fixe mieux que le sublimé seul, et met notamment 

 mieux en évidence les détails de la structure nucléaire. 



