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Comme les spores, surtout celles des especes aerobics de Granulobacter, sont tres 

 resistantes et supportent meme une forte ebullition, et que la presence de ces microbes 

 dans les cultures de Chroococcum, meme quand cette presence peut etre decelee 

 difficilement par un examen microscopique, suffit a produire une notable fixation 

 d'azote, il est necessaire de prendre des precautions toutes particulieres pour les cul- 

 tures combinees avec les especes qui n'engendrent pas de spores, et de steriliser soig- 

 neusement les liquides nourriciers. C'est cette circonstance qui a fait que nous avons 

 cru pendant si longtemps que, chaque fois que nous observions une fixation d'azote 

 dans les cultures de Chroococcum, combine avec des microbes non-sporogenes, ces 

 cultures contenaient quelques rares germes de Granulobacter qui, en depit de toutes 

 nos precautions, avaient ete presents dans la matiere d'infection consideree a tort 

 comme pure, et avaient ainsi passe dans le liquide nourricier ou y etaient tombes lors de 

 1'infection. Mais, ainsi que nous 1'avons dit tantot, apres de nombreuses experiences, 

 il n'etait plus possible de douter de 1'exactitude de nos observations. 



Toutes les especes du genre Granulobacter perdent facilement leur pouvoir fixa- 

 teur d'azote libre par une culture prolongee a 1'air, comme c'est le cas p. ex. pour les 

 cultures pures sur un terrain solide. La preuve de ce fait nous a paru importante et 

 nous a engages a inserer dans les tableaux mainte determination qui autrement n'au- 

 rait pas du etre prise en consideration, en egard a la faible quantite d'azote fixee. 

 Mais, comme ces determinations se rapportaient toujours a des cultures qui, au com- 

 mencement, c. a d. apres leur isolation recente, avaient donne un gain d'azote tres 

 considerable, il n'etait pas sans interet de les noter. 



La perte de cette fonction va exactement de pair avec le pouvoir que possedent 

 les memes formes de se contenter de peu d'oxygene pour leur croissance, c. a d. avec 

 la perte de leur microaerophilie, ce qui resulte aussi de leur culture en plein air. *) 



Pour des experiences sur la fixation d'azote, ou Ton se sert de Granulobacter, ces 

 remarques sont importantes: si Ton desire fixer beaucoup d'azote, il est recommandable 

 de se servir de cultures pures fraichement isolees. A cet effet on doit introduire dans 

 la solution nourriciere du terreau pasteurise et le Chroococcum; au bout de 2 a 3 jours 

 on obtient une culture profuse de Granulobacter + Chroococcum. On inocule ensuite 

 sur de 1'agar au glucose, et les colonies aerobics de Granulobacter ainsi obtenues, qui 

 generalement s'etendent de tous cotes jusqu'a de grandes distances, sont immediatement 

 mises a profit pour les cultures combinees. Si Ton veut transporter le microbe sur un 

 terrain solide dans des eprouvettes pour des cultures en series, on fait bien d'y ajouter 

 le Chroococcum, parce qu'on evite ainsi jusqu'a un certain point la degenerescence du 

 Granulobacter, le Chroococcum diminuant la tension de 1'oxygene en solution dans ie 

 milieu de culture. 



La haute pression de 1'oxygene atmospherique a pourtant une influence analogue sur 

 !a variation de Chroococcum et sur celle des symbiontes qui ne forment pas de spores, 

 notamment le Radiobacter, quoiqu'ici les effets soient moins nets et echappent aisement 

 a 1'observation. Je dois toutefois insister ici sur ce point. Le Chroococcum est une 

 bacterie tres variable, tant au point de vue de la physiologic de sa nutrition que sous 

 d'autres rapports ; c'est ainsi qu'elle peut perdre sa propriete remarquable de se colorer 



*) On ne peut pas se servir ici du mot anaerobiose, puisqu'il s'agit d'especes qui 

 se laissent fort bien cultiver a 1'air libre. 



