24 



Auch hier 1st es notwendig, zur Erhaltung eines guten Resultates, der Nahrlosung 

 viel Sand und Natriumhumat oder humusreiche Erde zuzufiigen, und wenn die 

 Decke sich bildet, diese nicht durch Schiitteln zu brechen; die Kulturen miissen also 

 ruhig stehen bleiben. 



Reinkultur. 



Obschon nicht besonders schwierig, erfordert die Reinkultur des Spirillums 

 grosse Aufmerksamkeit. Auf Flatten von der Zusammensetzung: Wasser, 2% Agar, 

 1 % Kalziummalat, 0,05% KiHPO* entstehen bei 20 30 C. an der Luft kleine, trocke- 

 ne Kolonien (Fig. b), welche aus unbeweglichen Stabchen ohne Fett bestehen und 

 nicht deutlich spirillenahnlich sind, was tibrigens auch bei anderen Spirillenarten be- 

 merkt wird. Die Kolonien oxydieren das Malat stark und sind erfiillt und umgeben 

 von kleinen, durchsichtigen glasartigen Sphariten von Kalziumkarbonat, also ahnlich 

 wie in den Azotobacterkulturen, wo ich Korner von bis Millimeter Grosse fand. Ware 

 es moglich, dieselben weiter wachsen zu lassen, so wiirden wertvolle Perlen zu erhalten 

 sein. Die Kolonien sind meistenteils wirklich rein und enthalten nicht die Infektionen, 

 welche es so schwierig machen, vollig reine Azotobacterkolonien zu erhalten. Dieses ist 

 jedoch nicht mit alien Kolonien der Fall; die infizierten Kolonien sind viel grosser 

 wie die reinen. Infolge einer starken Schleimbildung sehen sie wie Kleistertropfen 

 aus und auf den Flatten nehmen sie wochenlang an Volum zu. Dieser Schleim ist als 

 Wandsubstanz, die durch die infizierende Art gebildet ist, aufzufassen und beher- 

 bergt wieder leicht andere fremde Bakterien. Die starke Schleimbildung, welche fur 

 Azotobacter so charakteristisch ist, besonders bei Zuckernahrung, fehlt dem Spirillum 

 selbst, wie es scheint, ganzlich, doch muss ich hervorheben, dass dieser Vorgang in 

 den infizierten Kolonien noch weiterer Erklarung bediirftig ist. 



Versetzt man den Nahrboden mit einer geringen Menge einer guten stickstoff- 

 haltigen Nahrung, wie Fleischbouillon, so verbessert sich das Wachstum sehr; ver- 

 diinnter Fleischbouillonagar scheint der beste Nahrboden, und darauf nehmen viele 

 Stabchen normale Spirillengestalt mit mehreren Windungen an (Fig. c), wahrend 

 Fettbildung ganz ausbleibt. Man sieht selbst in solchen Praparaten spirochatenahn- 

 liche Individuen herumschwimmen. 



In flussige Nahrmedien iibergebracht, entwickeln die Reinkulturen sich nur dann 

 gut, wenn gute Stickstoffnahrung vorhanden ist, z.B. in verdiinnter Malatbouillon. 

 Stickstofffreie Malatlosungen geben nur dann Wachstum, wenn viel humose Erde 

 oder Humate zugesetzt werden. 



Die partiellen Reinkulturen, welche also noch andere saprophytische Bakterien 

 enthalten, geben ein besseres Wachstum; vielleicht. weil dadurch die stark ausge- 

 sprochene Mikroarophilie der Spirillen begiinstigt wird. Alle friiher besprochenen An- 

 haufungen sind solche partiellen Reinkulturen und beweisen, dass die Stickstoffbin- 

 dung darin nur durch die Spirillen stattfindet, denn wenn diese fehlen, so ist keine 

 Stickstoffmehrung nachweisbar. 



Stickstoffbestimmungen. 



Azotobacter- und Clostridium-ireie Rohanhaufungen und partielle Reinkulturen 

 in Kalziummalat-haltigen Nahrlosungen sind fiir die Bestimmung der Stickstoff- 



