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Zusatz, aufgeschichtet, die Glaser bei gleicher Temperatur aufbewahrt 

 und in bestimmten Zeitintervallen die Hohe der verfliissigten Gelatine- 

 schicht mit dem MaBstab gemessen. - - 2. Fur gen an e Bestimm tin gen 

 empfiehlt es sicli. Fibrin oder koaguliertes HiihnereiweiB als Priifungs- 

 objekt zu wiihlen und die Menge des gelosten Stickstoffes zu bestimmen. :, 

 Man bring! abgewogene Mengeu Fibrin in abgemessene Mengen der 

 enzymhaltigen Fliissigkeit, digeriert bei 37 , erhitzt die Fllissigkeit zum 

 Sieden, neutralisiert 'genau (zweckmafiig unter Zusatz von 5 10 ccm 

 konzentrierter Kochsalzlosung auf 100 ccm Fliissigkeit), fiillt auf ein 

 bestimmtes Volumen auf, liltriert durch trockene Filter und bestimmt 10 

 in einem aliquoten Teil des Filtrates den Stickstoff nach KJELDAHL. 

 Handelt es sicli um eine Enzymlosung, die selbst groBere Mengen von 

 koagulierbarem Eiweifi enthalt, wie die PreBsafte aus Bakterien, so ist 

 der Fibrinzusatz unnotig. Man bestimmt einfach vor und nach der Di- 

 gestion unter Inuehaltung des beim Fibrin angegebenen Verfahrens die 15 

 Menge des in Losung gegangenen Stickstoffs. Selbstverstandlich kaun 

 man auch statt dessen die Menge des ungelosten Fibrins oder EiweiB 

 bestimmen, indem man dasselbe nach Koagulation auf einem gewogenen 

 Filter sammelt, wascht und wagt. Die hier erwalmten Versuchsanord- 

 nungen konnen in gleicher Weise zttm Nachweis der proteolytischen 20 

 Endoenzyme und der Ectoenzyme benlitzt werden. 



Die Beschreibung der Darstelhmg der proteolytischen Eiizyme 

 soil bei den Ectoenzymen beginnen. Die einfachste Methode, um zu 

 relativ reinen Priiparaten zu gelangen, ist die Alkoholfallung, die von 

 RIETSCH (1) und FEKMI angewandt wurde. Will man eine Beimengung 25 

 von fremden Eiweifikorpern nach Moglichkeit vermeiden, so ziichtet man 

 die betreffenden Bakterienarten auf eiweiBfreien Nahrboden, was aber 

 nicht iniiner angangig ist; sonst gelit man von gewolmlichen Bouillon- 

 kulturen aus. Man fallt die etwa achttagigen Kulturen mit dem 8 10- 

 fachen Volumen Alkohol nach vorhergegangener Konzentration im Va-ao 

 kuum, filtriert den Niederschlag ab und wascht wiederholt mit absoltitem 

 Alkohol, eventuell noch mit Aether r.nd zerreibt den Niederschlag zu 

 einem feinen, trockeneu Pulver. Dieses letztere enthalt natiirlich auch 

 eine Menge anorganischer Salze, die aus der wiisserigen Losung des 

 Pulvers grofitent-eils durch Dialyse entfernt werden konnen. Die Enzyme 35 

 diffundieren nach FERMI (1) nicht. ZweckmaBig gestaltet man die 

 Alkoholbehandlimg moglichst kurz, weil sonst die Enzyme geschadigt 

 werden und auch die Wasserloslichkeit des Niederschlags beeintrachtigt 

 wird. Schonender scheint noch die Fallung mit Aceton zu sein (s. 14. Kap. 

 d. IV. Bds.). Da manche Bakterienarten durch die Alkohol- bzw. Aceton- 40 

 behandlung nicht getb'tet werden, so muB man, um die Wirkung leben- 

 der Bakterien aus dem Trockenpraparat ausztischalten, gegebenenfalls 

 vor der Konzentration und Alkoholbehaudlung die Fliissigkeiten durch 

 Ton- oder Kieselgurfilter keimfrei liltrieren oder aber den v o 1 1 i g trockenen 

 Alkohol- oder Acetonniederschlag auf 120 erhitzen, was ohne wesent- 45 

 liche Schadigung der proteolytischen Enzyme in den meisten Fallen ge- 

 scheheu kann (s. u.). Ganz reine Praparate der Enzyme lassen sicli 

 Selbstverstandlich auf diesem \Vege nicht gewinnen, wohl aber aus dem 

 Alkoholniederschlag konzeutrierte Enzymlosungen darstellen. Zum 

 Zwecke der Darstellung von proteolytischen Endoenzymen ziichtet so 

 man groBere Mengen von Bakterien auf mit Agar gefiillten Kolleschalen, 

 hebt die feuchten Bakterienmassen mit dem Spatel ab oder splilt sie 

 mit Hilfe von steriler Kochsalzlosung ab, die man durch Centrifugieren 



