HÉMOGLOBINE. 323 



îles globules, lors de l'exlrjiction des ^az du sang. Le liquide ainsi enrichi en hémoglo- 

 bine dissoute a beaucoup de tendance à cristalliser (Preyer). On peut ranger les animaux, 

 suivant la facilité de plus en plus grande de cristallisation de leur hémoglobine, dans 

 l'ordre suivant, : grenouille, bœuf, mouton, lapin; porc, homme; souris, taupe, chauve- 

 souris; oie, poule, pigeon, chien, chat, cheval; écureuil, cobaye, rat. 



Obtention de petites quantités d'oxyhémoglobine cristallisée. — Quand on 

 veut obtenir rapidement quelques cristaux d'oxyhémoglobine pour une démonstration 

 au microscope, on s'adresse d'habitude aux petits animaux de laboratoire (rat, cobaye). 

 Pour provoquer la destruction des hématies, on peut recourir à divers procédés. On 

 peut, à l'exemple de Funke, mélanger sur le porte-objet une goutte d'eau et une de 

 sang, attendre un début de dessiccation sur les bords et couvrir. 



RoLLETT emploie la congélation ; le sang délîbriné est congelé dans une capsule en 

 platine plongée dans un bain réfrigérant. Il reste gelé une demi-heure, est dégelé, 

 introduit dans un tube à réaction et donne rapidement des cristaux. On peut aussi, à 

 l'exemple de Max Schultze, produire la dissolution des globules dans le sérum, grâce à 

 l'action d'une température de 60». Après chaufîage, on place une goutte sur porte-objet, 

 on laisse refroidir, évaporer partiellement et l'on couvre. 



GscHLEiDEN introduit le sang délîbriné dans des tubes qu'il scelle et abandonne à la 

 putréfaction (favorisée par une température de 37°) pendant quelques jours. Au moment 

 du besoin, on casse la pointe du tube, on dépose une ou deux gouttes de sang sur un 

 porte-objet et l'on rescelle le tube. Le sang s'oxygénise rapidement, on le laisse dessé- 

 cher légèrement sur les bords, avant de couvrir la préparation. Un tube scellé, rempli 

 de sang de rat ou de cobaye, peut servir pendant des années. 



Obtention de grandes quantités d'oxyhémoglobine cristallisée. — Pour obte- 

 nir de grandes quantités d'oxyhémoglobine cristallisée, on recourt d'habitude au sang. 

 du cheval ou du chien. A cause de la grande altérabilité de la substance à la tempéra- 

 ture ordinaire, il est à conseiller d'opérer au cours de l'hiver, dans des pièces froides. 



Méthode de Hoppe-Seyler (applicable au sang du chien et du cheval). Le sang délî- 

 briné est dilué dans 10 volumes d'eau salée (3 p. 100). On laisse reposer dans un endroit 

 frais et on décante. Le magma globulaire est agité avec son volume d'éther. Après 

 destruction des globules, on sépare l'éther de la solution que l'on filtre rapidement. Le 

 filtrat refroidi à 0» est additionné du quart de son volume d'alcool absolu, également 

 refroidi à 0°. Le mélange est maintenu entre — o" et —10», jusqu'à ce que la cristalli- 

 sation se soit effectuée. 



Celle-ci débute habituellement après quelques heures. On sépare par filtration les cris- 

 taux de leurs eaux-mères, en maintenant la température au-dessous de 0°. On lave les 

 cristaux avec un mélange de 1 partie d'alcool absolu et 4 d'eau, mélange préalablement 

 refroidi. On sèche les cristaux le plus possible par expression et on procède à une 

 recristallisation. Les cristaux sont additionnés de tiois fois leur volume d'eau distillée; 

 on chauffe à ;»5°, on filtre. Le filtrat est traité à 0" comme la première fois. 



On peut recommencer ces opérations cinq ou six fois. 



Les cristaux purs sont séchés à une température inférieure à 0° dans le vide sur 

 acide sulfurique ou anhydride phosphorique. Si la température est plus élevée, l'oxyhé- 

 nioglobine fonce en couleur et devient partiellement insoluble dans l'eau. 



Cependant Zinoffsry (3) prétend qu'étalés en couche très mince, les cristaux d'oxyhé- 

 moglobine de cheval peuvent être séchés en 8 heures dans le vide entre 10° et 20° sans 

 subir d'altération. Ils se redissolvent intégralement, et l'acétate de plomb ne précipite' 

 pas leur solution (signe d'absence de méthémoglobine). L'hémoglobine pure cristallisée 

 et sèche subit sans altération un chauffage jusque 110° et 113°. 



Modification de Hafnev (4). — Ce proce'dé s'applique au sang de chien, porc, bœufi 

 cobaye et rat. La séparation des globules se fait ici beaucoup plus rapidemeJit et com- 

 plètement, grâce à l'enàploi de la force centrifuge. 



La destruction des globules s'opère en ajoutant aux globules un minimum d'eau disr 

 tillée (300 centimètres cubes pour les globules d'un litre de sang de porc) et en mainte-, 

 nant le mélange pendant quelques minutes à 40". On filtre et on refroidit ù 0°, on ajoute 

 un quart de volume d'alcool absolu à 0" et on refroidit entre — 10° et — 20°. Les cristaux 

 sont séparés par centrifugation des eaux-mères, lavés au mélange glacé d'eau et d'alcool et 



