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cienl d'extinclion s de cette matière est constant. On l'appelle rapport d'absorption, et 

 on le désigne par la lettre A. 



Le coefficient d'extinrtion est donné par une lecture au speclrophotomètre. Le rap- 

 port d'absorption est établi une fois pour toutes. Ces deux valeurs étant connues, une 

 simple multiplication permet de déterminer la concentration. 



r = Ac 



HCfner a déterminé à différentes reprises la valeur du rapport d'absorption de 

 l'oxyhémoglobine en deux endroits du spectre d'absorption de cette substance. 



D'après les dernières données de cet auteur, la valeur A = 0,002070 correspond à 

 l'espace compris entre les deux bandes d'absorption (554 |x[j. — 565 [xjx), la valeur 

 A' = 0,001312 correspond à la région de la deuxième bande (531,5 [i.;j. — 542,5 [xa). 



Non seulement la tnéthode de Vierordt s'applique aux solutions contenant une seule 

 substance colorante, mais elle possède encore l'inestimable avantage de permettre de 

 doser simultanément plusieurs substances colorantes contenues dans un même liquide, à 

 condition de connaître leurs constantes spectrophotométiiques. 



Vierordt établit que l'absorption de lumière s'observant dans une partie déterminée 

 du spectre d'une telle solution est égale à la somme des coefficients d'extinction en cette 

 région des différentes substances prises isolément. 



Il suffira donc de connaître les rapports d'absorption de chacune des substances 

 colorantes en un endroit donné du spectre et de connaître ce rapport pour autant de 

 régions qu'il y a de substances en solution, pour établir un système d'équations qui 

 donnera la concentration de chaque substance. 



En physiologie, on aura rarement l'occasion de doser ainsi à côté l'une de l'autre 

 plusieurs substances colorantes. Mais le dosage de deux substances, telles que l'iiémo- 

 globine réduite et l'oxyhémoglobine existant côte à côte dans le même liquide et pou- 

 vant se transformer l'une dans l'autre, sera souvent très intéressant à faire. Un simple 

 examen spectrophotométrique y conduit sans la moindre difficulté. 



Si E est le coefficient d'extinction observé en un endroit donné du spectre, si A» est le 

 rapport d'absorption pour l'oxyhémoglobine en cet endroit, et A^ celui de l'hémoglobine 

 réduite, on aura, d'après la loi de Vierordt, en faisant la concentration de l'oxyhémoglo- 

 bine égale à a? et celle de l'hémoglobine réduite à y : 



E=^ + IL 



A„ A,. 



E', A'„, A ,. représentent les valeurs correspondantes en un autre endroit du spectre. 



D'où 



^=X. +A 



A'A',.(E' A'„ — EA„) 

 A'„ Ar— A„ A'p 

 _ A„A'„(E A, — E' A',.) 



A'„ Ar— A„ A'r 



En 1900, HuFiXER (71) a proposé une formule plus simple permettant la même 

 recherche. Si l'on suppose déterminé pour l'osybémoglobine le rapport —^=1,578, 



et pour l'hémoglobine réduite —"^ := 0,762 correspondant aux régions déjà mentionnées 



rj 



du spectre, il est clair que la valeur -^ trouvée pour toute solution contenant un 

 mélange d'hémoglobine oxygénée et réduite doit être comprise entre ces deux limites. 

 Cette valeur — s'approchera d'autant plus de la limite supérieure 1,578 que la solution 

 sera plus oxygénée; elle tendra de plus en plus vers 0,762 dans le cas inverse. 



