j040 BACTÉRIES. 



faciles 'à distinguer. Il est même possible de mettre à profit des méthodes spéciales de 

 coloration qui permettent de fixer sur les bactéries seules une matii're colorante, tandis 

 que d'autres éléments, s'il on existe, restent indemnes ou peuvent être teints à leur tour 

 d'une nuance autre que la première, formant ainsi un contraste facile à saisir. C'est 

 ainsi que, dans un organe contenant des bactéries, ou dans un liquide riche en éléments 

 figurés, sang ou pus par exemple, on parvient aisément à colorer les bactéries d'une 

 nuance donnée el à dornier aux autres éléments une teinte tout autre; ce qui aide puis- 

 samment à leur distinction et à l'élude de leurs rapports. 



Avant d'user des procédés de coloration, il est nécessaire de faire intervenir la fixa- 

 tion qui permet de conserver la forme et les rapports des éléments divers à étudier. 

 Pour les coupes de tissu, c'est encore l'alcool qui est à iiréféror; pour les bactéries en 

 suspension dans les liquides, il faut uniquement recourir à la chaleur. Dans ce dernier 

 cas, l'opération doit être conduite de la façon suivante. Une goutte du liquide à exa- 

 miner, pur ou dilué dans de l'eau soigneusement filtrée, est déposée sur une lamelle 

 bien propre et étalée à sa surface avec le fil de platine llambé. La lamelle est desséchée 

 avec soin à une chaleur douce, puis soumise à une lemiu'-ralure élevée en la passant 

 à trois reprises dans la llainme d'une lampe à alcool ou d'un bec de Bunsen brûlant 

 à bleu, en ayant soin de tourner en haut la face sur laquelle se trouve la couche de des- 

 siccation. 



La fixation ainsi obtenue, on peut soumettre les préparations à l'action des bains 

 colorants. Les couleurs à employer sont surtout les couleurs d'aniline basiques, princi- 

 palement les violets, violet de gentiane ou violet 5B, la fuchsine, le bleu de méthylène. 

 Les couleurs acides, éosine, safranine, ont beaucoup moins d'élection et sont surtout 

 employées comme colorants de fond. 



Il est parfois nécessaire, pour aider à la fixation de la couleur sur les bactéries, 

 d'ajouter aux bains colorants des substances qui jouent pour ainsi dire le rôle de mor- 

 dants. Ce sont surtout les alcalis, potasse, soude, eau anilinée; d'autres fois l'acide phé- 

 nique, le tannin, etc. Ces mordants ne doivent être ajoutés qu'en minimes proportions. 



Certaines bactéries cédant plus facilement que d'autres la couleur «ju'elles ont retenue 

 aux réactifs décolorants tels que l'alcool, les solutions acides, il devient parfois précieux 

 de rechercher ce caractère en faisant agir, après coloration, ces agents décolorants. On 

 peut employer l'alcool seul ou après action de l'iode. Dans ce dernier cas, on a intérêt à 

 employer la méthode dite de Gram. Les préparations, sorties du bain colorant, sont 

 plongées dans la solution de Gram (iode i gramme, iodure de potassium 2 grammes, 

 eau distillée 300 grammes) jusciu'à noircissement complet, puis lavées à falcool absolu 

 jusqu'à décoloration. C'est une méthode employée couramment en bactériologie; il 

 est des espèces qui restent colorées après le traitement, d'autres au contraire qui se 

 décolorent. 



Les acides, agents décolorants très énergiques, ne sont guère employés que pour 

 rechercher quelques espèces qui retiennent très énergiqnement leurs colorants. Le 

 Bacille de la tuberculose et le Bacille de la lèpre, colorés au bain d'eau anilinée, ne se déco- 

 lorent pas, ou seulement après un temps assez long, lorsqu'on les soumet à l'action d'une 

 solution d'acide nitrique au tiers. 



Les préparations gagnent à être éclaircies avec un peu d'essence de girofles et mon- 

 tées dans le baume. 



Cultiver des bactéries, c'est les faire vivre et se multiplier dans des milieux qui con- 

 tiennent des substances dont elles peuvent se nourrir. Lorsque les milieux sont purs de 

 germes et qu'on n'y ensemence sûrement qu'une seule espèce, on obtient des cultures 

 pures. L'obention et l'emploi des cultures pures sont la véritable clef de la bactériologie. 



Les milieux usités sont liquides ou solides. 



Parmi les mUieux liciuide^, il faut placer en première ligne les bouillons de viande, 

 obtenus par décoction. Les infusions végétales ou les liqueurs exclusivement minérales 

 sont en général moins favorables; elles peuvent cependant rendre des services. 



Les milieux soUde:^ sont surtout des gelées; les unes, à base de gélatine, ont le défaut 

 de se liquéfier au dessus de 22°; les autres, à base de gélose, supportent même des tem- 

 pératures supérieures à 40°. On emploie encore fréquemment le sérum sanguin solidifié 

 par une température de 68° et des tranches de pommes de terre cuites. Pour priver 



