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Aussi L. C. M.ULLARD (03 f) juge-t-il ne"cessaires Irois perfectionnements : 



1 Se contenter, pour oxyder la portion de 1'indoxyle qui ne s'oxyde pas spontan6- 

 ment, d'ajouter peu a peu et avec prudence de 1'eau oxygtuiee diluee. 



2 Laver par NaOH a 1 p. 100 la solution chloroformique, ce qui elimine radicale- 

 ment toutes les matieres etrangeres (phenols, acides et oxyacidcs aromaliques, elc.) et 

 laisse les couleurs indigotiques en etat de puret6 absolue. 



3 Faire ce lavage alcalin aussitfit que possible afin d'arrfiter la transformation en 

 indirubine et de fixer la plus grande partie possible du produit a 1'etat d'indigotine, ce 

 qui a des avantages pour le titrage ulterieur. 



En elTet, tons les auteurs ciles (Fa. OBEUMAYER, E. WANG, J. BOUMA, A. ELLINGKR, 

 L. C. MAILLARD), une fois obtenu 1'extrait chloroformique sec, le reprennent par H 2 SO* 

 concentre qui transforme les couleurs indigotiques en leurs derives sulfones solubles 

 dans 1'eau. La solution aqueuse est alors titree par KMnO 4 , qui transforme les derives 

 sulfones de 1'indigotine et de rindirubine en derives sulfones de 1'isatine. Pour 1'indi- 

 gotine, 1'oxydation a lieu a froid : la teinte bleue disparait de la solution, qui ne 

 conserve qu'une teinte rose due a 1'iudirubine (et non a KMnO 1 ). II faut alors 

 chauffer vers 78-80 : a son tour 1'indirubine sulfone"e est oxydee par KMnO 4 et la 

 teinte rose disparait peu a peu, laissant place a un liquidejaune pale(isatine sulfonee). 

 Si on continuait, Toxydation aboutirait encore a 1'acide anthranilique, et c'est seule- 

 ment plus tard qu'on verrait reparaitre la teinte rose du permanganate. 



La reaction a lieu suivant 1'equation : 



5 C 32 H-JAz40i + 8 KMnO 4 + 12 H*S0 4 = 20 CSRSAzO 2 + 4 K 2 SO* + SMnSO* + 12 H 2 

 Indigotine. Isatine. 



Indirubine. 



On emploie du permanganate a 3 grammes par litre, titre par rapport a 1'acide 

 oxalique d'apres 1'equaLion : 



2 KMnO 4 + 5 C 2 0*H a + 3 H 2 SO* = 2 MnSO 4 + K 2 S0 4 + 10 CO 2 + 8 H 2 



qui se conserve bien et qu'on dilue 40 fois pour 1'emploi. 



Voici, en resume, la technique a recommander (L. C. MAILLARD, 03 f] : 

 Dosage de Vindoxyle. Precede MAILLARD. Faire d'abord un essai qualitatif, d'apres 

 le procede indique plus haut (Recherche de Vindoxyle. Proce'de MAILLARD) : le resultat 

 permettra d'estimer la quantit6 a mettre en O3uvre. Pour des urines ordinaires pre- 

 lever 700 centimetres cubes; pour des urines plus riches, 350 centimetres cubes; pour 

 des urines plus riches encore, une quanlite variable, qu'on estimera, mais 1'etendre 

 a 3bO centimetres cubes. Additiotiner les 700 centimetres cubes de 70 centimetres 

 cubes de sous-acetate, ou les 350 centimetres cubes de 35 centimetres cubes de 

 sous-acetate; agiter, filtrer. Introduire dans un eritonnoir a robinet de 2 litres, 550 cen- 

 timetres cubes, ou dans un entonnoir de 1 litre, 275 centimetres cubes du fil- 

 trat, avec 50 centimetres cubes de chloroforme. Verser 5oO centimetres cubes, ou 

 275 centimetres cubes, de HC1 pur; agiter violemment pendant quelques minutes, 

 decanter le chloroforrne, et le remplacer tant qu'il se colore. A ce moment ajouter 

 successivement 1, 2, 3... gouttes de H 2 0-, et parfaire ('extraction. Reunir tout le chloro- 

 forme, decanter, filtrer. Laver 3-4 fois par 2 volumes au moins d'eau distillee, filtrer. 

 Laver 2-3 fois avec NaOH a 1 p. 100, filtrer. Laver 3 fois a 1'eau distillee, decanter tres 

 exactement en passant sur filtre sec. Distiller dans un petit ballon au bain-marie, 

 dessecher le residu en soufflant a 1'aide d'un tube au fond du ballon chaud. Verser sui\ 

 le residu 10 centimelres cubes de H 2 S0 4 pur, et abandonner pendant 1 heure vers 

 60-80. Verser doucement, en agitant, dans 1/2 litre d'eau dans un vase de Boheme; 

 ajouter les lavages du ballon. Avoir du KMnO 4 a 3 grammes par litre environ, exacte- 

 ment litre" a 1'acide oxalique. En prendre 5 centimetres cubes, diluer a 200 centimetres 

 cubes, remplir une burette. Verser dans la solution du sulfone, jusqu'a disparition du 

 bleu. Porter le liquidea 80, continuer 1'addition de KMnO 4 , jusqu'a disparition de toute 

 trace rouge dans le liquide jaunatre. Exprimer les resultats en indoxyle, et pour cela 

 multiplier par 1,0556 le poids d'acide oxalique cristallise (C 2 4 H 2 ,2H ! 0) qu'oxyderait le 

 KMnO* verse. Rapporter le resultat au litre, en multipliant par 2 ou par 4, et, s'il y a 

 lieu, par le chiffre de dilution de 1'urine. 



