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Naturwisscnseliaftliclic WochcnscliriCt. 



Nr. 44. 



Mischt man das Tul)crculin mit dem fnftacheii Vo- 

 limu'n absoluten Ali^oliols, dann scheidet sich eine braune 

 iiarzartifje ]\Iasse aus, welclie dem Boden des Gefs.ses 

 fest anhaftet. Sowohl die abgeschiedene braune Masse, 

 als die darber stellende braune Flssigkeit, welche sich 

 klar abgiessen lsst, zeigen bei der Prfung in nahezu 

 gleicher Strke die Tubcrculinwirkung. Eine Trennung 

 lsst sicii also auf diese Weise nicht erreichen. 



Wenn al)er Aiknhol in innner grsserem Ucberschuss 

 angewendet wird, dann bekommt man schliesslich statt 

 der harzartigen Masse einen feinkrnigen Niederschlag, 

 der, wiederholt mit al)solutcm Alkohol gewaschen, auf 

 einem gehrteten Filter unter Absaugen gesammelt und 

 im Vacuum ber Schwefelsure getrocknet, ein fast weisses 

 Tulvcr giebt. Um diesen Niederschlag zu erhalten, ver- 

 fiirt man am zweckmssigsten in der Weise, dass man 

 das Tuberculin langsam in die 20- bis 25 fache Menge 

 von absolutem Alkohol unter fortwhrendem Umrhren 

 eintrpfeln lsst, nach dem Absitzen des Niederscidags 

 den Alkohol aljgiesst, von neuem absoluten Alkohol in 

 gleicher Menge hinzufgt, dies einige Male wiederholt 

 und schliesslich den Niederschlag in der angegebenen 

 Weise trocknet. Wenn man es versucht, den alkohol- 

 fenchten Niederschlag durch Erwrmen auf dem Wasser- 

 bade zu trocknen, dann sintert er zusammen und wird 

 bruidich; im Vacuuniexsieeator dagegen trocknet er zu 

 einer weissen, schwannnigen Masse, die leicht zu Pulver 

 zerdrckt werden kann. Das Tuberculin giebt bei der 

 liehaudlung mit Alkohol etwa 10 ",(, trockenes Pulver. 

 Letzteres ist aber keineswegs die wirksame Substanz in 

 reiner Beschaffenheit; denn es enthlt neben dieser noch 

 eine Menge in Alkohol unlslicher Extractivstofte. Auch 

 gelingt es nicht, durch aijsoluten Alkohol den wirksamen 

 Stofi' vollstndig aus dem Tuiierculin niederzuschlagen. 

 Demi, wenn der abhltrirte Alkohol verdunstet wird, dann 

 bleibt eine gelbliche klare Flssigkeit zurck, welche aus 

 dem Glyccrin und den im letzteren gelsten Substanzen 

 besteht. Von dieser Flssigkeit gengen 0,5 cem nicht 

 mehr, um ein Thier zu tdten. Aber in einem Versuche 

 erfcdgte der Tod nach Injectiou von 1 ccni, in einem 

 anderen von 1,5 cem. 



Wenn nun aucli durch Ausfllen mit Alkohol nicht 

 die Gesanmitmenge des wirksamen Stoffes aus dem 

 Tuberculin gewonnen werden kann, so lsst sich doch 

 auf diese Weise ein grosser Theil von unwirksamen Sub- 

 stanzen entfernen und darunter vor allem das Glycerin, 

 welche auf die Lsungsverhltnisse der im Tuberculin 

 enthaltenen Stoffe von wesentlichem Einflsse sind. 



Es kam nun weiter darauf an, Trennungen des im 

 Alkoholniederschlag vorhandenen Gemisches von Kfiriiern 

 zu liewirken. Zu diesem Zwecke wurden unter Mit- 

 wirkung der Herren Proskauer und Prof Brieger so 

 ziendich alle hierfr in Frage kommenden Methoden ver- 

 sucht, von denen ich nur folgende speciell erwhnen 

 will: Behandlung ndt Ammoniumsulfat, Magnesiumsulfat, 

 Kaliumcarbonat, Baryt, Pliosi)hormolybdnsure, Phos- 

 phoswolframsure, Eisenacetat, Bleiacetat, Tannin, Thier- 

 kohle. Aber keine von diesen Methoden hat zum Ziele 

 gefhrt. Entweder wurde der wirksame Stoff, wie beim 

 Animoniunisulfat, noch zu sehr durch andere Stoe ver- 

 unreinigt abgeschieden, oder er verlor seine Wirksamkeit 

 von vornherein, oder er liess sich nicht in wirksamer 

 Form von dem Fllnngsmittel trennen. So konnte z. B. 

 mit Tannin alles wirksame aus dem Tuberculin gefllt 

 werden, und der Niederschlag hatte, durch Zusatz von 

 Natiumcarbonat in Lsung gebracht, noch seine volle 

 A\'irksamkeit, aber es ist nicht gelungen, die wirksame 

 Substanz nun wieder vom Tannin abzuscheiden. Viel- 

 leicht htten diese Versuche bei weiterer Fortsetzung 



doch noch Erfolg gehabt, wenn es nicht inzwischen auf 

 einem anderen Wege gelungen wre, dem Ziele nher 

 zu kommen, wodurch jene Methoden vorlufig in den 

 Hintergrund gedrngt wurden. Es war mir nmlich auf- 

 gefallen, dass, wenn der Alkohol mit dem Tuberculin in 

 einem sehr viel niedrigeren Verhltniss, wie in den 

 frheren Versuchen, und zwar im Verhltniss von 2 : .3 

 gemischt wird, es nicht zur Ausscheidung der braunen 

 harzartigen Masse kommt, sondern sich ein weisser 

 flockiger Niederschlag bildet, der sich gut absetzt und 

 durch Splen mit Alkohol von gleicher Concentration 

 leicht reinigen lsst. Es wird bei diesem Versuch ein 

 Theil Tuberculin (z. 15. 10 cem) in ein Becherglas gethan, 

 und unter Umrhren anderthalb Volumtheile (in diesem 

 Falle 15 cem.) absoluter Alkohol hinzugefgt, das Glas 

 verdeckt und 24 Stunden stehen gelassen. Es hat sich 

 dann in der duukelbraunen Flssigkeit ein flockiger 

 Bodensatz gebildet. Die obere Flssigkeit wird vor- 

 sichtig abgegossen, 607o Alkohol in gleicher Menge zu- 

 gegossen, umgerhrt und wieder zum Absetzen hingestellt. 

 Dies wird so oft, 34 ^lal, wiederholt, bis der ber dem 

 Niederschlag stehende Alkohol fast ungefrbt ist, dann 

 wird einige Male mit absolutem Alkohol in gleicher Weise 

 gesplt (in der Regel gengt dreimalige Spidung), der 

 Niederscldag auf das Filter gebracht, abgesogen und im 

 Vaeuumexsiccator getrocknet. Er giebt dann eine schnee- 

 weisse Masse, welche nach dem Trocknen bei 100" (wo- 

 bei sie 7 9% Wasser verliert), in gepulvertem Zustande 

 leicht grau gefrbt erscheint. Kleinere Mengen des 

 Niederschlages kann man auch auf dem Wasserbade vom 

 Alkohol befreien, ohne dass sein Aussehen dadurch ge- 

 schdigt wird, wie es bei dem nnt 100 "/o Alkohol er- 

 haltenen unreinen Niederschlage der Fall war. 



Dieser durch Ausfllen mit tiO"/ Alkohol erhaltene Nie- 

 derschlag bertrifft alle auf andere Weise ans dem Tuber- 

 culin hergestellten Stoffe so sehr an Wirksamkeit und ver- 

 hlt sich bei allen bisher mit demselben angestellten Reac- 

 tionen so constant, dass man ihn als nahezu rein ansehen 

 kann; vielleicht bildet er schon in Wirklichkeit das voll- 

 kommen isolirte wirksame Prineip des Tubereuiins. Wh- 

 rend von dem 100"yoigen Alkoholiuederschlag mindestens 

 50 mg erforderlich sind, um dieselbe AVirknng zu er- 

 zielen wie ndt 0,5 g Tuberculin, gengen von dem 

 607o'gen Alkohoiniederschlag 10 mg; in mehreren Ver- 

 suchen star])en die Thiere schon auf 5 mg, in einem 

 Falle sogar auf 2 mg an ausgesprochener Tubcrculin- 

 wirkung. Die Ausbeute betrgt etwa l^o*)- Berck- 

 sichtigt man die Wirkung der gewonnenen Menge im 

 Verhltniss zu derjenigen des verarlieiteten Tubereuiins, 

 dann ergiebt sich , dass dem Tuberculin kaum die Hlfte ' 

 der wirksamen Substanz durch die Fllung mit 60",, 

 Alkidiol entzogen wird, und dem entspricht auch die 

 Prfung des Filtrates, von welchem nach Entfernung des 

 Alkohols und Zusatz von Wasser bis zum urs|)rnglichen 

 Volumen 0,75 bis 1,0 g zur sicheren Tdtung eines tuber- 

 culsen Thieres erforderlich ist. 



Der 60'Vo'gc Alkohoiniederschlag, welchen man vor- 

 lufig als gereinigtes Tuberculin l)Czeichnon knnte, hat 

 folgende Eigenschaften. 



Er lst sich im Wasser ziemlich leiciit, am schnell- 

 sten, wenn er in einer Reibsehale mit dem Wasser ver- 

 rieben wird. Eine derartige Lsung behlt indessen 

 nicht sehr lange Zeit volle Wirksamkeit, denn es_ wurde 

 wiederholt beobachtet, dass sie schon nach ein bis zwei 

 Wochen erheblich an Strke der Wirkung abgenonnnen 



*) Die Aushoud' lilsst sich leicht steiiSjoni, wenn niiin mehr 

 Alkohol, z. B. tJ"/- TOVo dem TiibiTciilin zusetzt. Dniin werden 

 aller nicht allein grssere Mengen des wirksamen Stotlcs, sondern 

 auch andere Stoffe niitgefallt und man erhlt kein reines Prparat. 



