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Naturwissenschaftliche Wochenschrift. 



N. F. XVII. Nr. ii 



verglichen worden sind, mil grofier Wahrschein- 

 lichkeit ausgeschlosseri werden. 



Wir konnten ferner unsere beiden enzymhal- 

 tigen Substanzen A und B noch scharfer gegen- 

 einander unterscheiden ; und zwar folgendermafien : 



A ist m mal starker, bzw. reiner als B, wenn 

 wir beim Versuche mit dem Substrat finden, daS 

 (S- Sl ) _ (S-s 2 ) 



. 



t t 



Wir haben hier m mal starker wirksam gleich 

 gesetzt m mal reiner. A priori konnte man das 

 wohl annehmen , aber die zahlreichen Ver- 

 suche haben ergeben, dafi diese Annahme nicht 

 immer zutrifft. Es gibt wohl Enzyme, bei denen, 

 - aller Wahrscheinlichkeit nach ') Reinheit 

 und Starke der enzymatischen Wirkung in einem 

 linearen Verhaltnis zueinander stehen; aber es 

 existieren auch solche, wo die aus angewandten 

 Mengen Enzymen und Mengen des durch dasselbe 

 zersetzten Substrates als Abscissen bzw. Ordinaten 

 erhaltene Kurve eine logarithmische Funktion 

 darstellt. 2 ) 



So haben wir nun bereits, nach der Art der 

 Beziehung zwischen Starke und Reinheit, die 

 Enzyme, ohne weitere Riicksicht auf die Natur 

 der Substrate und die Art ihrer Spaltprodukte, in 

 2 Klassen einteilen konnen. 



Bei den Enzymen der ersten Klasse, also denen 

 mit einem linearen Verhaltnis von Starke der 

 enzymatischen Wirkung zu chemischer Reinheit, 

 liefie sich nun weiterhin denken, dafi durch Losen 

 in Wasser, Kochsalzlosungen oder einem andern 

 Vehiculum und mehrmahge Wiederholung der 

 zurEnzymisolierung angewandten Methode, star kere, 

 bzw. reinere Enzyme -- durch den Grad ihrer 

 Wirkung auf das Subsirat bestimmt -- sich er- 

 halten liefien, und dafi man nach n Wiederholungen 

 bei einer enzymatisch wirkenden Substanz anlangt, 

 die gegeniiber der vorhergehenden der (n lj ten 

 Abscheidung keine Steigerung ihrer Wirksamkeit 

 gegeniiber dem Substrate autweist. 



Wir hatten dann ein reines, bzw. das reine 

 Enzym, in Handen. Diese Annahme ist jedoch 

 nicht richtig, und zwar deshalb nicht, weil wir 

 nicht wissen konnen, ob nicht die angewandte 

 Abscheidungs- bzw. Reinigungsmethode als solche 

 das Enzym, wenn auch nur schwach, schadigt; 

 d. h. genauer ausgedriickt, folgendermafien wirkt: 

 sie macht das Enzym a mal starker wirksam durch 

 Abscheidung von Verunreinigungen (= nicht enzy- 

 matisch wirkender Substanzen) und gleichzeitig 



*) Denn wir nehmen an, dafi hier die Verunreinigungen 

 keinen Einflufl auf die Katalyse ausiiben. 



2 ) Zu diesen Ergebnissen konnte man gelangen, auch ohne 

 ttber ein wirklich reines Enzym zu verfugen, einfach indem 

 man steigende Mengen an Enzym zu den Versuchen nahm. 

 Angenommen, man hatte ein Enzym von 5O/ Reinheit; so 



a 50 



sind in a g - g Reinenzym enthalten, und 2 a g wiirden 

 loo & 



also a g Reinenzym entsprechen; sofern wir auch hier die 

 Annahme zu machen berechtigt sind, dafl die Verunreinigungen 

 auf den Verlauf der Katalyse ohne stbrenden Emtlufl sind. 



b mal schwacher wirksam durch die chemische, 

 bzw. physikalische Einwirkung auf seine Struktur. 



Nun konnen wir wohl I. gleiche Mengen der- 

 selben ursprunglich erhaltencn enzymisch wirk- 

 samen Subsianz mit verschiedenen Methoden 

 gegeniiber verschiedenen Substraten priifen. 



Hatten wir nun so ermittelt, welche Kombi- 

 nation von Methode und Substrat die beste ist, 

 d. h. welche Methode die grofiie analytische Ge- 

 nauigkeit besitzt, 1 ) so konnten wir 2. mit dem so 

 gefundenen Priifungsverfahren untersuchen, bei 

 welcher Art der Remigung (stoffliche Beschaflen- 

 heit des Fallungsmittds, Temperatur, Grad der 

 Alkalitat bzw. Aciditat der Dialysenflus-sigkeit usw.) 

 die Werte fur die enzymatische Wirkung am 

 raschesten in die Hohe gehen und wir wiirden 

 nun bei Anwendung dieser so ausgesuchten Reini- 

 gungsmethode den Weg einschlagen, bei dem das 

 oben erorterte Verhalten von a:b am vorteilhaf- 

 testen wird, namlich a nioglichst grofi, b moglu.hst 

 klein. Reinigungsverfahren aber, bei denen b = O 

 ist, scheinen nicht zu existieren, jedes schadigt 

 die Wirkung des Enzyms etwas, wenn auch nur 

 wenig. Bezeichnen wir als Rcinigungs- bzw. Ver- 

 starkungsquotienten (a, a^ a 2 . . . a n ) dasjeweilige 

 Verhaltuis der zersetzten Substratmengen, wie sie 

 durch zwei in der Reinigung aufemander foJgende 

 gleiche Quanta Enzym erhalten werden, so crgibt 

 sich, dafi, da im Anfange am meisten Unreimg- 

 keiten entfernt werden *) a / a, / a a . . . ) a n und 

 somit nach n maligem Umfallen die Summe der 

 Quotienien nicht n mal a sondern (aj +a 2 +a 8 + . . . 

 + a D ) ist. 



Umgekehrt wird aber das Enzym bei jeder 

 Reinigung um einen gewissen Betrag b geschadigt. 

 Bezeichnen wir analog b, b,, b 2 . . . b n als Schadi- 

 gungs- bzw. Schwacnungsquotienten, so betragt 

 die wirkliche Verstarkung des Enzyms nach den 

 aufeinanderfolgenden Abscheidungen nur a b, 

 a, bj, a 2 b 2 . . . a n b n . Nach n Umfallungen 

 betragt die Schadigung dann mindestens 

 n mal b. ,,Mindestens" deshalb, weil durch die 

 fortschreitende Reinigung das Enzym empfind- 

 licher wird (vielleicht durch Entfernung vonSchutz- 

 kolloiden), sehr wahrscheinlich betiagt aber die 

 Schadigung (b+bj+b 2 + . . . b n ) wobei b b t b 2 ... 

 < b n ist. 



Wir miissen also bei unserm Reinigungsver- 

 fahren nach einer n ten Umfallung oder Dialyse ein 

 Maximum an enzymatischer Wirkung erhalten, das 

 Produkt der n+ i ten Umtallung zersetzt wieder 



*) Wir muflten also, wenn wir uber q Methoden und p 

 verschiedene Substrate verfugen q mal p Versuche ansetzen, 

 von denen jeder einzelne wieder mehr oder weniger weitgehende 

 Varialionen zuliefie in bezug auf Temperatur, H-Ionenkonzen- 

 tration, Gegenwart von Neutralsalzen usw. Wie oft wird aber 

 in der Praxis nur eine Methode und em Substrat angewandt 

 und dann gleich darauf ein Reinigungsverlahren autgebaut, 

 das eine Substanz liefert, aus der dann weitgehende Schlusse 

 auf die Natur der Enzyme gezogen werden I 



! J Analog dem Ausschutteln Extrahieren mit einem 

 guten Losungsmittel. 



