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Naturwissenschaftliche Wochenschrift. 



N. F. XIV. Nr. 42 



zustellen. Die elektive Methode besteht darin, dafi 

 wir auf eine Mischung verschiedener Bakterien- 

 arten solche Entwicklungsbedingungen einwirken 

 lassen, welche die gewiinschte Bakterienart in dem 

 MaBe begiinstigen, wie sie unerwiinschte Begleit- 

 bakterien hintanhalten. Die fur Clostridium 

 Pasteurianum auslesend wirkenden Existenz- 

 bedingungen sind: Eine an gebundcnem Stickstoff 

 freie Nahrlosung, Vorhandensein einer reichlichen 

 Kohlenstoffquelle in Form von Dextrose, voll- 

 standiger Sauerstoffabschlufi und die Ziichtungs- 

 temperatur von 35 C. Auf folgende Art und 

 Weise kann man nach meinen Erfahrungen leicht 

 Rohkulturen von Clostridium Pasteurianum ge- 

 winnen, wobei neben der erwiinschten Bakterien- 

 art noch andere Spezies sich bemerkbar machen. 

 In flaschenformige Glasgefafie, die leicht luftdicht 

 verschlossen werden konnen, wird eine stickstoft- 

 freie Nahrlosung gegeben, die aufier den notwendigen 

 Mineralsalzen 1 2 / Dextrose enthalt. Die 

 Menge der Nahrlosung ist so zu wahlen, da8 nur 

 einige Kubikzentimeter Luft in die Flasche ein- 

 geschlossen werden. Der Flascheninhalt wird mit 

 etwas Bodenemulsion geimpft und bei 35 C be- 

 briitet. Schon nach 2 3 Tagen zeigt die Nahr- 

 losung kraftige Triibung, begleitet von starker Gas- 

 produktion. Die Flasche mufi, soil sie nicht ein 

 Opfer der beginnenden Garung werden, Gasab- 

 flu6 erhalten. Die Fliissigkeit riecht stark nach 

 Buttcrsaure. Die in der Nahrlosung enthaltene 

 Dextrose wird nur zum kleinen Teile vom sich 

 entwickelnden Clostridium zum Aufbau des Korpers 

 verwendet, die viel grofiere Menge fallt der Butter- 

 sauregarung anheim, um die zur Stickstoffbindung 

 notwendige Energie zu liefern. Durch mehrmaliges 

 Ubertragen von garendem Fiascheninhalt in neue 

 Kolben, wobei zweckmafiigerweise ein Erwarmen 

 des Impfmaterials auf 70 C stattfindcn soil, um 

 nicht sporenbildende Begleitbakterien auszuschalten, 

 fiihrt zu Heinkulturen. Diese Reinkulturen, in 

 reinem Stickstoffstrom gehalten, fixieren bedeutende 

 Mengen gasformigen Stickstoffes, um ilin zum 

 Korpcraufbau verwenden zu konnen. Pro Gramm 

 vorwiegend zu Buttersaure, Essigsaure, Kohlen- 

 dioxyd und Wasserstoff zersetzte Dextrose werden 

 2 3, im Maximum 6 mg Stickstoff festgelegt. 

 Eine charakteristische Eigentumlichkeit der in 

 Frage stehcnden Bakterienart besteht darin, dafi 

 die spindelformig aufgctriebenen Stabchenmembran 

 nurteilweiseaufgelost wird und deshalbzipfclmiitzen- 

 artig iiber die Spore gcstiilpt erscheint. 



Nach dem Clostridium Pasteurianum wurden 

 noch mehrere andere Clostridicn aufgefunden und 

 beschrieben, denen die Fahigkcit zukommt, den 

 Stickstoff der Luft zum Korperaufbau verwenden 

 zu konnen. Es seien genannt : Das ( 'l<>s/n'ifinni 

 II 'uUiynicitm aus siidrussischer Erde, die Clostridien 

 <*> ft, y> <5 und aus Boden von Marburg, sowie 

 das Clostridium 0zerziz?OT#zausBaumwollsaatmehl. 

 Durch miihevolle Untersuchungen gelang es 

 Bredemann zu zcigen, dafi alle Granulose fiihren- 

 den Buttersaurebakterien zu ein und derselben 



Spezies gehoren. Unter iibereinstimmenden 

 Zuchtungsbedingungen bei der Kultur konnen die 

 verschiedenen Stamme ineinander iibergefiihrt 

 werden. Bredemann fafite 27 Stamme, die bis 

 anhin teils als verschiedene Arten, teils als Varie- 

 taten auseinander gehalten worden sind, zur Spezies 

 Bacillus aiin'loliicttr zusammen. Das Stickstoff- 

 bindunosvermopen erwies sich als recht labile 



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Eigenschaft, wird beim ktinstlichen \\'eiterziichten 

 leicht stark reduziert, ja, kann ganzlich verloren 

 gehen. Durch Kultivieren auf sterilisierten Boden- 

 proben, kann clas Vermogen, Stickstoff zu fixieren, 

 wieder regenetiert werden. AuBer Dextrose konnen 



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auch Rohr- und Fruchtzucker, Dextrin und Inulin 

 dem Bacillus amylobacter als geeignete Energie- 

 quellen gereicht werden, Auf Grund eigener Unter- 

 suchungen kann ich mittcilen, da(3 sich unser 

 Mikroorganismus in der Natur weitcster \ r erbrei- 

 tung erfreut ; er ist in grofierer Menge nachweis- 

 bar sowohl in den Tal wie in den alpinen Boden 

 verschiedenster Herkunft und wird in der Nadel- 

 und Laubstreu der VValder selten vermifit. 



Nun die zweite Gruppe freilebender stickstoff- 

 fixierender Spaltpilze: die A zo tobakt ergruppe, 

 die sauerstoffliebenden stickstoffbindenden Bak- 

 tericn. Im Jahre 1901 machte uns Beijerinck 

 in Delft unte'r Zuhilfenahme der elektiven Methode 

 mit dem haufigsten Vertreter dieser Gruppe, mit 

 Azotobacli'r chrwcvcciun Beij. naher bekannt. Fiir 

 Azotobakter sind folgende Ziichtungsbedingungen 

 elektiv: Eine an gebunclenem Stickstoff freie Nahr- 

 losung, Vorhandensein eincr reichlichen Kohlen- 

 stoffquelle in Form von Mannit, tunlichst reich- 

 licher Sauerstoffzutritt und die Temperatur von 

 28 30 C. Nach meinen Erfahrungen kann auf 

 folgende Weise eine Mischkultur von Azoto- 

 bacter mit anderen Mikroorganismen erhalten 

 werden. In breit ausladende Erlenmeyerkolben 

 wird ca. ein Zentimeter hoch eine stickstoffreie 

 Nahrlosung gegeben, die aufier den notwendigen 

 Mineralsalzen I 2/ Mannit enthalt. Der Kolben- 

 inhalt wird mit etwas Bodenemulsion oder mit 

 frischer Laubstreu aus einem Wald geimpft und zu 

 28 30 C gestellt. In der Regel entwickelt sich 

 nach 2 3 Tagen an der Oberflache der Nahr- 

 losung eine erst zarte, graue, spater derb und braun 

 werdende Decke. Das mikroskopische Bild zeigt 

 die grofien Azot obak terzell en , begleitet von 

 zahlreichen anderen Mikroorganismen, uwter denen 

 verschiedene Kurz- und Langstabchen, Infusorien 

 und Amoben selten fehlen. Diese Rohkultur bildet 

 das Ausgangsmaterial zu reizenden Studien im mikro- 

 skopischen Gesichtsfelde. Besonders interessant 

 ist es die Mahlzeiten der Amoben zu verfolgen. 

 Jedes Tierchen verzehrt pro Tag Hunderte von 

 Spaltpilzen. Ein besonders geschatztes Amoben- 

 futter scheint Azotobakter zu sein, so dafi, 

 falls die Amoben, unterstiitzt durch Infusorien, 

 einige Tage in der Rohkultur ungestb'rt ihre Jagd 

 durchfiihren konnen, Azotobakter schlicfilich 

 verschwindet. Der Geschmack dieser Amoben 

 scheint kcin schlechter zu sein, wenigstens sind 



