36 RECHERCHES CYTOLOGIQUES SUR LA FECONDAT1OX DES ASC1DIENS. 



ensuite fixees a des moments differents, depuis 2 minutes apres 1'addition du sperme jusqu'au 

 moment de 1'eclosion de la larve. J'ai constate que la premiere segmentation se produit 

 (30 a 65 minutes apres 1'addition du sperme et que la larve est completement formee en 15 a 

 19 heures. Ces chiffres sont sensiblement plus eleves que ceux donnes par Conklin 

 (1905, 1), ce qui pent s'expliquer par des conditions differentes de temperature: de fait, a 

 Naples, le printemps de 1912, et surtout le mois d'Avril furent loin d'etre chauds. 



Pour etre certain de ne recueillir que du materiel normal, j'ai toujours observe les 

 premieres segmentations et je n'ai conserve que les ceufs dans lesquels ces phenomenes se 

 produisaient dans les delais habituels et simultanement dans la plupart d'entr'eux. Des 

 portions qui devaient etre fixees pendant la premiere heure et par consequent avant 1'appa- 

 rition du premier sillon, j'ai constamment isole des ceufs temoins, dont j'observais la segmen- 

 tation : si celle-ci etait anormale, la portion fixee etait rejetee. J'ai fixe environ 120 portions. 



Les liquides employes furent ceux de Benda, d'Altmann, de Flemming, de Regaud et 

 le sublime acetique. 



Les oeufs fixes par le liquide tie Regaud et par le sublime acetique furent colores, les 

 premiers par I'he'matoxyline ferrique, les seconds par ce meme colorant, par 1'hematoxyline 

 acide, pur la safranine et par le vert de methyle. Les resultats obtenus furent des moins 

 satisfaisants. J'esperais par le premier liquide conserver les chondriosomes; par le second, 

 les figures achromatiques. Or, j'ai constate que, dans Fun comme dans 1'autre cas, la struc- 

 ture de 1'ceuf etait completement alteree, les grains de vitellus eux-memes etant a peine 

 reconnaissables. 



De tres nombreuses portions, formant une serie complete, furent fixees par le liquide 

 d'Altmann. Mais, quand il s'agit de colorer ces ceufs, la plupart se montrerent refractaires. 

 Meme le mordam;age par la methode de Pal, recommande par Rubaschkin (1910), ne 

 donna pas de resultats. Je ne sais a quelle cause attribuer cet echec, d'autant plus regret- 

 table erne cette serie etait la seule complete, si ce n'est peut-etre a un sejour trop prolonge des 

 objets dans 1'alcool: ce sejour n'a pourtant pour aucune portion depasse trois mois. 



J'avais heureusement fixe un certain nombre d'ceufs et d'embryons par la methode de 

 Benda, et ce sont surtout ces ceufs qui m'ont donne des resultats interessants. La aussi, 

 rependant, j'ai eprouve certaines deconvenues. Mes premiers essais de coloration ne don- 

 nerent absolument rien. Ce n'est qu'.apres avoir fait repasser les ceufs par les alcools dc 

 concentration decroissante et I'eau, pour les amener successivement dans le melange d'acide 

 pyroligneux et d'acide chromique, puis dans le bichromate de potasse, suivant la prescrip- 

 tion de Benda, que j'ai pu ohtenir des colorations, et cette fois d'excellentes. Cette obser- 

 vation montre que, contrairement a ce que je pensais autrefois (1910), ce traitement pent 

 dans certains cas etre utile ou meme indispensable. 



Les portions traitees par le liquide de Flemming etaient toutes bien fixees. La colora- 

 tion par rhematoxyline ferrique m'a donne dans certains ceufs unc bonne coloration des 

 chondriosomes. Un certain nombre furent colores par la safranine et 1'acide picrique, ou 

 par la triple coloration de Flemming. Les chondriosomes ne sont alors pas colores; la zone 

 ou ils sont accumules reste cependant reconnaissable. Ces preparations me rendirent des 

 ser\ T ices dans 1'etude de la chromatine de 1'ceuf et du spermatozoi'de. 



Pour 1'enchassement des oeufs, je me suis servi avec succes des tubes en gelatine recom- 

 mandes par Meves (1911). 



Les coupes furent faites en series, a 4, 5, et 7^4- Pour les preparations destinees a 

 etre colorees par les methodes de Benda ou d'Altmann, 1'epaisseur des coupes n'a jamais 

 depasse 5/x; elle fut lo plus souvent de 4ju. 



