PRODUCTION DE LEUCOCYTES PAR FRAGMENTS DE RATE 811 



Ringer inutile que Ton remplace immédiatement par le milieu 

 de culture, recouvrant les morceaux de tissu dune couche 

 mince. Le milieu qui a été utilisé ici, décrit par Carkel, est 

 composé de quatre parties de sérum de cobaye neuf et d'une 

 partie d'une solution à 2 p. 100 de gélose dans du liquide 

 physiologique. Le mélange effectué à une température de 

 40° à 42°C. est conservé au bain-marie à celte même température 

 jusqu'au moment de l'emploi. Les tubes renfermant les frag- 

 ments et le milieu sont hermétiquement fermés par un capu- 

 chon de caoutchouc destiné à éviter l'évaporalion, et sont placés 

 à l'étuve à 38°, en position très fortement inclinée. 



La principale cause d'insuccès est la contamination des cul- 

 tures. C'est pourquoi, après avoir essayé plusieurs techniques, 

 cultures sur lames de verre, en boîtes de Pétri ou en godets 

 creux, nous nous sommes arrêté à la méthode ci-dessus décrite. 

 Elle a sur toutes les autres cet énorme avantage d'éviter 

 l'exposition directe à l'air libre des fragments à cultiver et de 

 supprimer ainsi le principal agent de contamination. Il est 

 même recommandable — et c'est ainsi que nous avons pro- 

 cédé — de faire toutes les manipulations sous une vitre qui 

 protège contre la chute des poussières les mains de l'opérateur 

 et les objets qu'elles manipulent. Le temps de culture terminé 

 (trois à cinq jours), les tissus ont été examinés de deux façons. 

 La première consiste à séparer et à prélever au moyen d'une 

 pipette effilée la zone de milieu qui entoure immédiatement les 

 fragments cultivés et qui contient, comme nous le verrons plus 

 loin, les éléments de la prolifération de ces fragments. On 

 l'étalé sur une lame porte-objet; on fixe et on colore comme s'il 

 s'agissait d'une préparation bactériologique ou d'une prépara- 

 tion de sang* pour l'examen des leucocytes (coloration à la 

 thionine ou au bleu de Leishmann-Romanowsky). La seconde 

 fut la fixation en masse dans le liquide de Bouin des fragments 

 inclus dans leur milieu de culture et la préparation histolo- 

 gique de ces pièces débitées en coupes sériées. La première de 

 ces méthodes convient mieux que la seconde pour l'examen des 

 leucocytes qui se rétractent au contact des liquides fixateurs et 

 perdent de leurs caractères cytologiques. La seconde façon de 

 procéder permettra l'étude des fragments en culture et de leur 

 prolifération. 



