416 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 



pour l'ensemencer dans du bouillon mis à 33", on voit qu'après 

 quatre jours à 45°, les bacilles ont péri ; cependant la culture 

 obtenue le troisième jour est encore active. 



Dans le cours de nos expériences, nous avons rencontré 

 deux fois des cultures atténuées spontanément. 



Au mois d'avril 4888. nous avions isolé, de fausses membranes diphtéri- 

 ques, une colonie qui nous fournit un bacille très actif, tuant rapidement les 

 cobayes et les lapins. Pendant les années 1888 et 1889, un grand nombre 

 de cultures de ce bacille ont été faites, sans que l'on ait constaté leur affai- 

 blissement. Une d'entre elles, restée longtemps à l'étuve, puis plusieurs mois 

 à la température de la chambre, fut semée à nouveau et donna des cultures 

 inoffensives pour les lapins, même quand on en injectait 2'^'= dans les veines. 

 Ces cultures tuaient encore les cobayes. 



Le 1-4 mai 1889, on a extrait d'une fausse membrane un bacille qui 

 faisait périr les cobayes en moins de 48 heures. Une culture, en bouillon, 

 de ce bacille, gardée à 30", du 27 mai au 31 août, fournit des cultures-filles 

 qui laissaient vivre une partie des cobayes inoculés sous la peau, et ne 

 tuaient les autres qu'après un temps assez long. 



Comme dans ces deux exemples la virulence des bacilles 

 était bien déterminée à l'origine, il est certain qu'il y a eu atté- 

 nuation dans les cultures. 



Nous avons essayé de réaliser celte atténuation d'une ma- 

 nière régulière, en exagérant l'action de l'air sur les cultures. 

 Pour cela, nous avons cultivé le bacille diphtérique très viru- 

 lent, dans du bouillon en faible épaisseur, placé dans un flacon 

 de M. Fernbach. Par les tubulures latérales passait un courant 

 d'air aspiré par une trompe à eau. Le flacon était placé dans une 

 étuve à 35°, et, pour éviter une évaporation trop rapide, l'air 

 barbotlait, avant son entrée, dans un flacon laveur mis à la 

 même température. Le bacille diphtérique, ensemencé ainsi dans 

 du bouillon aéré, croît plus abondamment que dans les condi- 

 tions ordinaires. Au bout de 36 heures, le liquide, primitivement 

 alcalin, est déjà acide et, dès le quatrième jour, il est de nouveau 

 alcalin. Ces changements de réaction ne s'accomplissent qu'en 

 une quinzaine de jours dans un flacon témoin laissé à côté 

 du flacon aéré. Tous les deux jours, on fait une prise de semence 

 dans le flacon aéré et le flacon témoin, et on les introduit dans du 

 bouillon. Après 24 heures, on inocule ces cultures-filles par 



