3 iO ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 



servait à l'analyse, l'autre qu'on introduisait dans des tubes à 

 essai garnis de coton. Chaque tube en renfermait de oc. c. à 10 c. c. 

 Le ballon, les tubes à essai et l'échantillon étaient ensuite stéri- 

 lisés à l'autoclave à 120°, pendant un temps qui variait de 

 I.'i minutes à 3/4 d'heure, suivant le volume des vases. 



Dans cette opération, une partie du liquide du ballon était 

 refoulée dans le vase par l'air expulsé, mais lors du refroidisse- 

 ment, un vide partiel se produisant, le liquide du vase faisait 

 retour au ballon et le remplissait entièrement, sans courir le 

 risque d'être contaminé, grâce au tampon de coton. Le ballon 

 refroidi était ensuite porté dans l'étuve à 35°, où il restait en 

 observation pendant plusieurs jours avant d'être ensemencé. 



Ensemencement. — Une colonie isolée était prélevée au moyen 

 d'un fil de platine flambé sur une tranche de pomme de terre et 

 portée aussitôt dans l'un des tubes à essai contenant le même 

 liquide que le ballon à ensemencer. Ce tube était ensuite étiré à 

 sa partie moyenne. Le coton qui le fermait était flambé avec soin 

 et refoulé jusqu'à l'étranglement du tube, puis on étirait en 

 pointe la partie supérieure de manière à pouvoir l'engager dans 

 le caoutchouc d'une trompe à eau. Le vide étant fait, on fermait 

 le tube à la lampe dans sa partie étirée et on le portait à l'étuve. 



Vingt-quatre ou quarante-huit heures après, la fermentation 

 étant active, on sortait le tube de l'étuve et, présentant sa pointe 

 effilée à la flamme d'un bec de Bunsen, on laissait échapper les 

 gaz et on recueillait une petite quantité de liquide au moyen d'un 

 tube effilé et flambé. C'est là la semence destinée à ensemencer 

 le grand ballon. 



Pour cela, on ôte avec précaution le tube de caoutchouc qui 

 coiffe le tube droit; on flambe le coton qui le ferme et on le 

 remplace par un autre préalablement stérilisé. D'autre part, on 

 brise avec des pinces flambées l'extrémité de la pipette conte- 

 nant la semence, et on l'introduit dans le tube droit en soulevant 

 lecoton. Une reste plus qu'à remettre le coton en place ainsi que 

 le tube de caoutchouc, que pour plus de sûreté on remplace par 

 un autre, stérilisé dans une solution de sublimé au millième. 



On reporte alors le ballon à l'étuve, en prenant soin de faire 

 plonger l'extrémité du tube recourbé dans un verre contenant 

 du mercure, pour éviter toute communication entre l'atmo- 

 sphère et le liquide. 



