632 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 



par Schottelius pour stériliser les œufs, ont pu diminuer la 

 résistance et la vitalité des poussins qui en sortaient. 



Enfin la complexité matérielle de ces expériences ne permet 

 pas de les poursuivre assez longtemps. 



C'est pourquoi il était nécessaire de tourner la difficulté en 

 s'adressant à un animal dont les conditions d'organisation et de 

 vie permettent de simplifier les manipulations expérimentales. 



M. Metchnikoff s'arrêta au têtard de grenou ille (Rana 

 temporaria), et me chargea d'exécuter l'expérience suivante: 



Les œufs de grenouilles sont fécondés extérieurement. On 

 n'a donc pas la ressource de les obtenir stériles dès le début. 

 Mais ils ont une épaisse enveloppe muqueuse qui protège le 

 vitellus et l'embryon du milieu ambiant. 



Il s'agit donc de débarrasser l'embryon de son enveloppe 

 impure et de le transporter aseptiquement en milieu stérile. 



Le têtard vit dans l'eau et se nourrit de pain. Il est donc très 

 facile de stériliser à 120° un peu de pain dans des ballons et de 

 les remplir ensuite d'eau stérilisée l . 



Il est un peu plus difficile d'obtenir l'embryon à l'état pur. 



L'enveloppe muqueuse présente deux couches que facilement 

 on désagrège. La surface de la couche externe est recouverte de 

 microbes et d'algues. Souvent cette flore s'insinue même dans 

 la profondeur et parvient jusqu'à la surface interne de cette 

 couche. Les algues y forment alors un transparent vert. 



La couche interne de l'enveloppe muqueuse n'est évidem- 

 ment pas un bon milieu de culture, soit parce qu'elle est plus 

 imperméable, soit parce qu'elle contient des sucs microbicides, 

 car on n'y observe de végétation qu'aux points de contact avec 

 la couche externe. 



Afin d'éliminer autant que possible les microbes superficiels, 

 on rince les œufs dans de l'eau stérilisée, puis on les met sous 

 un courant d'eau, traversant un filtre Ghamberland. 



On les y laisse jusqu'à ce que l'embryon devienne mobile, ce 

 qui prouve qu'il est prêt à sortir de l'œuf. Alors on transporte 

 les œufs un par un dans des vases d'eau stérilisée, où on les 

 lave encore. Puis, avec des aiguilles flambées, on désagrège les 

 membranes de l'œuf et l'on transporte l'embryon aussi rapide- 



1. L'eau ne doit pas être ajoutée avant la stérilisation, car le pain, désagrégé 

 par l'ébullition, troublerait le liquide. 



