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(la me esposla per rcndcrc fiUrabile il virus, ma in presenza di miscela 

 citrosodica sterilizzata e bollila. (Acqua dist. 1000, cloruro di sodio 9, 

 citrado di sodio 15.) 



c) Si filtra il maleriale ben trilurato altraverso Berkefeld W ben scelle e 

 conlrollate dopo la sterilizzazione e si distribuisce il fillrato prefcribilmente 

 in tubi da saggio forniti di una ditatazione latérale a bolla a circa 5 cm. dal 

 londo, i quali tubi debbono contenere in precedenza una quantità taie d'olio 

 d'anilina da raggiungere l'allezza di i cm.il tutto preyentivamente storilizzato 

 in autoclave. Di filtrato se ne introduce quella quantità che è suffîciente a 

 far quasi raggiungere al menisco delF olio divasellina il punto cui risponde 

 il bordo inferi-ore del foro délia dilatazione a bolla délia provetta. 



La djstribuzione dei filtrati si puo fare al coperto di ogni inquinamento 

 servendosi di adalto apparecchio di cui ho lornilo la descrizione nel 1907 

 {Annali di Iglene, 1907, pag. 570, nota). 



2° Preparazione dei leucociti. 



a) Si prépara del l'aleuronato stérile secondo la tecnica adatla a estrarre 

 la legumina [Ecmpicci. R. Soc. Iglene Milano, 1901) come piogeno ; lo si divide 

 in fiale de 10 cm. 1' una, ognuna délie quali si inocula interaraente nel cavo 

 peritonale di un coniglio. 



b) Si cstrae il liquide dopo 4-6 ore dal cavo peritoneale mettendosi nelle 

 volute condizioni per evitare ogni inquinamento dall' estenio e lo si introduce 

 in provetta da centrifuga sterilizzate contenenti una certa quantità di miscela 

 citrosodica: si lava, si centrifuga, quindi si décanta rapidamente il liquido e 

 si aspira il deposito con pipette sterilizzate contenenti 1 cm. c. di miscela 

 citrosodica stérile, la quale serve a disgregare il deposito, ed il tutto si fa 

 pervenire nel filtrato contenente il virus. 



3° Preparazione del colhire. 



a) Si obliquano i tubi da saggio a bolla in modo che tutto l'olio di vasellina 

 passi nella bolla. 



b) Si toglie il tappo d'ovatta e rapidamente si introduce nell' interno di 

 ogni tubo lutta la sospensione dei leucociti 'raccolta con la pipetla dai tubi 

 da centrifuga:. si tappa di nuovo e si radrizzano i tubi. 



c) Le provette innestate si pongono in termostato allô scuro entro un reci- 

 piente in cui sia stato fatto il vuoto e vi si sia mantenuto. 



Procedendo in questo modo nell' interno dei leucociti, al termine di una set- 

 timana si troveranno, osservando in campo oscuro, dei granuli fini, mobili i 

 quali per grandezza, forma e mobilità si comportano come i grani vaccinici 

 vaiolosi délia cheratite vaccinale vaiolosa, segnalati da me in preparati colo- 

 rati fin dal, 1906 nel vaccino [Annali di Igiene, 1906, pag. 128), e dal Volpino 

 in préparai! a fresco nel 1907 (Rie. Igiene San. Pubbl., 1907, pag. 734) e cosi 

 caratteristicamente descritti da quest' ultimo da meritare di essere chiamati 

 i corpuscoli del Volpino. 



Ouesto reperlo granulare non si nota nei preparati di controllo contenenti 

 i leucociti. 



