428 ANNALES DE L'INSTITUT PASTEUR. 



Le grand ennemi de ces cultures mixtes, c'est l'air qui exerce 

 une influence délétère sur les spores elles-mêmes, si celles-ci 

 sont conservées en milieu liquide et à l'air. Aussi, si les semences 

 n'étaient pas mises à l'abri de l'air, elles deviendraient bientôt 

 inactives. Le B. subtilislui-même perdla propriété de faire pousser 

 le tétanos au bout d'un certain temps, si on le laisse séjourner 

 dans le bouillon des tubes aérobies où il a poussé, sans fermer 

 le tube à la lampe : capuchonner est une précaution insuffisante. 

 Pour conserver au B. subtilis toute sou activité, il faut faire de 

 temps en temps des passages sur gélose; il vaut même mieux 

 le conserver sur gélose jusqu'au jour de l'ensemencement. 



Cette action nocive de l'air nous explique aussi pourquoi un 

 Bacillus subtilis qui résistait à 1 b. 20 d'ébullition, au moment 

 où il a été isolé, supporte à peine pendant une 1/2 lieure la 

 température de 100°, lorsqu'il a été immergé pendant longtemps 

 dans le bouillon de culture, soumis à l'action de l'air am- 

 biant. 



C'est avec la toxine ainsi préparée que j'ai fait les expé- 

 riences dont il va être maintenant question. 1/200 de c. c. de 

 cette toxine donnait un tétanos rapidement mortel aux cobayes, 

 mais il va sans dire que cette dose ne représente pas la dose 

 minima mortelle. Par mon procédé, j'obtiens une toxine aussi 

 forte qu'avec le procédé classique. J'ai déjà indiqué, dans la pre- 

 mière partie de ce travail, que j'avais doublé la toxicité de mon 

 bacille par le procédé des sacs, mais en retirant le sac du péri- 

 toine d'autant plus tôt que la toxicité s'exaltait davantage; 

 j'ai obtenu un microbe produisant une toxine qui tue un cobaye 

 de 400 grammes en 3 jours avec 1/1200 de c. c. et la souris en 

 5 jours avec 1/6000. On peut même obtenir davantage, mais cela 

 n'a pas d'importance dans la question qui nous occupe. Dans tous 

 les cas, quel que soit le bacille employé, la toxicité des cultures 

 anaérobies ordinaires sera la même que celle des cultures en 

 symbiose des bacilles subtilis et tétanique. 



C'est la toxine ainsi préparée qui m'a servi à immuniser les 

 lapins. J'ai commencé par leur injecter un mélange de toxine et 

 de liqueur de Gram, d'après le procédé de MM. Roux et Vail- 

 lard*. Le tableau ci-joint indique la marche de l'immunisation 

 d'un lapin contre le tétanos. 



1. Ces Annales, février 1893. 



