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L'agitatore porta inferiormente 2 o più braccia o palette, le quali stanno 

 immerse nel liquido culturale. Così si può mescolare bene il liquido senza 

 toccare il fungo che vi vegeta sopra ; il liquido deve naturalmente superare 

 di 1-2 cm. l'apertura inferiore del tubo che fa da calza all'agitatore. Si os- 

 serva, mentre si agita, il liquido per trasparenza, e, quando questo non fa 

 più scie, si toglie per l'apertura inferiore il volume necessario per i saggi. 



Gli altri due tubi che attraversano il tappo superiore, servono per far 

 circolare aria od altri gas per il vaso di cultura e per «seguire la semina. 

 A quest'ultimo scopo si ripartisce un'ansa piena di spore in 1-2 cm. di acqua 

 sterile e s'introduce questa sospensione, con l'aiuto di una pipetta ricurva, 

 iterile, per uno dei due tubi superiori (]). 



Tali vasi di cultura così preparati non si possono sterilizzare a caldo, 

 perchè si spaccano quasi tutti in corrispondenza della tubulatura inferiore ; 

 inconveniente a cui si pone facilmente riparo con la sterilizzazione a freddo 

 in liquidi antisettici. Ho provato il solfato di rame al 5 %, la formalina al- 

 l'I %, ma meglio di tutti serve l'alcool denaturato del commercio. Si empie 

 di spirito denaturato un profondo catino e vi si tengono immersi per un'ora 

 i pezzi separati del vaso di cultura, poi, senza toglierli da l'alcool, si ricom- 

 pongono a formare il vaso, indi, senza preoccuparsi di asciugarlo, si estrae 

 da l'alcool e si porta in vicinanza di un grande pallone (circa 2 litri) di 

 acqua sterile. Si chiude uno dei tubetti superiori con ovatta sterile, si pone 

 in comunicazione con la pompa e si fa affluire per l'altro tubo superiore 

 posto in comunicazione col pallone, mezzo litro di acqua sterile, aspirando 

 con la pompa. Si chiude poi la morsetta che intercede fra la boccia e il 

 pallone, si stacca la comunicazione con la pompa, si sciaguatta bene per lavar 

 via lo spirito e si apre la morsetta inferiore. L'operazione di lavaggio si 

 ripete tre o quattro volte, fino a che l'acqua di lavaggio non sa più di alcool 

 denaturato, poi si fa affluire nel medesimo modo la soluzione nutritizia 

 sterile. 



La quantità più adatta di soluzione per una boccia da un litro e per le 

 culture di Mucor è di 300 cmc. 



Con questo sistema non ho mai avuto un'infezione nelle mie grosse culture. 



La sterilizzazione con l'alcool ha anche il vantaggio che per l'evapora- 

 zione dello spirito l'anello di caucciù che chiude la frattura superiore viene 

 ad aderire così bene al vetro, che resiste ad una sovra pressione interna di 

 più di mezza atmosfera, e non lascia passare l'aria esterna neppure se la 

 pressione interna scende a 15 mm Hg ('/ 5 di atmosfera). Così è possibile far 

 circolare nell'apparecchio azoto, idrogeno o acido carbonico senza lutare l'a- 

 nello di gomma in modo speciale. 



Tutte le esperienze seguenti vennero fatte in vasi di questa sorta, della 

 capacità di un litro. Essi occupano troppo posto nei termostati, e quindi ho 

 dovuto tenere le culture a la temperatura della stanza (tutte ad egual luce), 

 ciò che determina uno sviluppo più lento e un ritardo nella formazione delle 

 spore, due vantaggi assai grandi per il mio scopo. 



(1) Pamtaxelli. — Jahrbilcher f. wiss. Botan, XL, p. 307 (1904). 



