66 F. F. NORD, M. BIER VOL. 12 (1953) 



La constante de sedimentation de la trypsine est de 2.4 a 2.5 S a pH 2.3 et 8. A pH inferieur a 

 2.3, la denaturation entraine I'apparition lente de corps a sedimentation plus rapide, tandis qu'a pH 8, 

 I'autolyse provoque I'apparition de produits de degradation a sedimentation plus lente. La vitesse de 

 sedimentation de la trypsine qui reste intacte n'est pas modifiee par la presence des corps a sedimen- 

 tation lente ou rapide. 



3. A des pH intermediaires, aux environs de 5, la constante de sedimentation peut augmenter 

 jusqu'a 3.5 5 selon les conditions, I'enzyme se sedimentant alors comme una proteine homogene. 

 Ceci est du a une aggregation equilibree reversible, qui depend etroitement de la temperature. Le 

 calcium empeche cette aggregation. 



4. On doit considerer la trypsine comme une proteine heterogene formee de deux constituants. 

 En I'absence de calcium, de manganese ou de cadmium, au voisinage de pH 5, I'interaction mole- 

 culaire reversible des deux constituants entraine la formation d'aggregats et donne le comportement 

 apparent, a I'ultracentrifugation et a I'electrophorese, d'une proteine homogene. L'addition de calcium 

 ou des deux autres ions empeche I'interaction, retablit le comportement normal a la sedimentation 

 et met en evidence I'heterogeneite reelle de I'enzyme a I'electrophorese. 



ZUSAMMENFASSUNG 



1. Bei ungefahr pH 5 ergibt die elektrophoretische Analyse von kristallisiertem Trypsin, das 

 fiir ein homogenes Protein charakteristische Bild, wahrend der Zusatz von Calcium, Magnesium oder 

 Cadmiumionen (0.033 ^) sine Trennung der beweglichen Grenzlinie in zwei unterschiedliche Spitzen 

 verursacht. Die beiden Komponenten des Trypsins haben eine vergleichbare Stabilitat sowohl in 

 Gegenwart als auch in Abwesenheit von Calciumionen und besitzen nach elektrophoretischer Tren- 

 nung eine ahnliche proteolytische Aktivitat. 



2. Trypsin hat eine Sedimentationskonstante von 2.4-2.5 5 bei den pH-Werten 2.3 und 8. Auf 

 der sauren Seite von pH 2.3 verursacht die Denaturierung ein langsames Auftreten von sich schneller 

 absetzenden Komponenten, wahrend bei pH 8 die Selbstverdauung zum Auftreten von sich lang- 

 samer absetzenden Abbauprodukten verursacht. Die Sedimentationsgeschwindigkeit des zuriick- 

 bleibenden unveranderten Trypsins scheint durch die Gegenwart von sich sowohl schneller als auch 

 langsamer absetzenden Komponenten nicht beeinflusst zu werden. 



3. In dem Zwischenbereich von ungefahr pH 5 kann je nach den Bedingungen die Sedimen- 

 tationskonstante zu 3.5 S ansteigen, und das Enzym sich als homogenes Protein absetzen. Dies ist 

 einem reversiblen Aggregationsgleichgewicht zuzuschreiben, das streng temperaturabhangig ist. 

 Calcium verhindert die Aggregation. 



4. Trypsin muss als ein aus 2 Komponenten bestehendes heterogenes Protein angesehen werden. 

 Bei Abwesenheit von Calcium, Magnesium oder Cadmium bei ungefahr pH 5 verursacht die reversible 

 molekulare Reaktion der beiden Komponenten die Aggregation und ergibt ein elektrophoretisch und 

 nach Untersuchungen mit der Ultrazentrifuge scheinbar einheitliches Bild. Die Zugabe von Calcium 

 oder der zwei anderen lonen verhindert die Reaktion, stellt das normale Sedimentationsverhalten 

 wieder her und verrat die wahre elektrophoretische Uneinheitlichkeit des Enzyms. 



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Received, March nth, 1953 



