VOL. 12 (1953) BIOCHIMICA ET BIOPHYSICA ACTA 283 



INFLUENCE DU MANGANESE SUR LA STABILITfi DU LYSOZYME 



n. ROLE PROTECTEUR DU MANGANESE LORS DE L'HYDROLYSE 

 DU LYSOZYME PAR LA TRYPSINE* 



par 



LUIGI GORINI, FRANCOISE FELIX et CLAUDE FROMAGEOT 



Laboratoire de Chimie biologique de la Faculie des Sciences, Paris [France) 



Le lysozyme est un materiel particulierement favorable a I'etude du role eventuel 

 d'un metal dans les relations existant, chez une proteine, entre denaturation et sensibilite 

 a Faction de la trypsine. La denaturation du lysozyme peut en effet etre facilement suivie 

 par la perte de son activite enzymatique ; on sait^ d'autre part que, a I'exclusion de nom- 

 breux autres metaux bivalents, le manganese (introduit sous forme d'ion Mn++) reduit 

 jusqu'a dix fois (pour une concentration de lo^^ M) la vitesse de sa denaturation ther- 

 mique irreversible. Si, comme cela a deja ete etabli dans le cas d'autres proteines, la 

 trypsine est capable de proteolyser le lysozyme seulement apres que celui-ci ait ete 

 denature, on peut a priori s'attendre a ce que le manganese exerce vis a vis de cette pro- 

 teolyse un effet protecteur analogue a celui qui a ete decrit^ pour le calcium dans le cas 

 de la serumalbumine par exemple. 



En fait, le present travail montre que : i. La vitesse de la proteolyse par la trypsine 

 du lysozyme enzymatiquement actif est limitee par la vitesse d'une reaction dont I'ener- 

 gie d'activation est relativement elevee; 2. le manganese protege fortement le lysozyme 

 contre Taction de la trypsine; 3. lorsque le lysozyme a ete prealablement inactive par 

 la chaleur, il devient directement hydrolysable par la trypsine, et Taction protectrice du 

 manganese ne se manifeste plus; 4. lorsque le lysozyme a ete seulement partiellement 

 inactive. Taction du manganese au cours de Thydrolyse de la proteine par la trypsine 

 permet de demontrer que ce lysozyme est alors constitue par un melange de molecules 

 ayant conserve leur activite lysante et de molecules tout a fait inactives, et non pas par 

 des molecules qui, toutes identiques entre elles, ne seraient que partiellement actives. 



PARTIE EXPERIMENTALE 



Techniques 



Le lysozyme (poids moleculaire = 14,800)* est dissous dans une solution tampon de borate 

 5- io~^ M a pH 7.92. La trypsine** est dissoute dans I'eau; la solution obtenue est diluee au moment de 

 I'experience par la solution tampon de borate. Le manganese est introduit sous forme de MnClj. Le 



Des observations preliminaires a ce travail ont fait I'objet d'une communication au Heme 

 Congres International de Biochimie, Paris, 1952I. 



** Trypsine cristallisee provenant de Worthington, Freehold. Avant d'etre utilise, I'enzyme est 

 debarrasse par dialyse du sulfate de magnesium qui I'accompagne au moment de sa livraison. Son 

 poids moleculaire est considere comme etant de 17,700^. 



Bibliographie p. 288. 



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