284 L. GORINI, F. FELIX, C. FROMAGEOT VOL. 12 (1953) 



milieu reactionnel est constitue par le melange, en proportions definies, de solution de lysozyme et de 

 solution de trypsine. Les concentrations indiquees pour chacune de ces deux substances, de meme que 

 pour le metal, sont leurs concentrations finales dans le melange. La proteolyse du lysozyme (pH 7.9, 

 milieu tampon borate) est suivie soit par le dosage du lysozyme encore actif, soit par celui des produits 

 d'hydrolyse. Le lysozyme encore actif est determine en mesurant la vitesse de lyse d'une suspen- 

 sion de Micrococcus lysodeikticus dans les conditions deja decrites^. La temperature de 25°, a laquelle 

 est faite cette determination, est suffisamment basse pour arreter pratiquement toute proteolyse; il 

 a ete d'autre part verifie que la presence de trypsine aux concentrations realisees ici n'exerce aucune 

 influence sur I'activite du lysozyme. En ce qui concerne les produits d'hydrolyse, leur dosage est fait 

 en mesurant I'extinction a 280 m/i du liquide surnageant obtenu apres centrifugation du melange 

 resultant de I'addition de 5 ml d'acide trichloracetique a 5 % a 3 ml du milieu reactionnel. Au cours 

 de ces mesures, on tient compte de la presence eventuelle des produits d'hydrolyse de la trypsine 

 elle-meme. 



Action de la trypsine sur le lysozyme actif 



L'action de la trypsine sur le lysozyme actif a deja fait I'objet de quelques obser- 

 vations^. L'etude de cette action est faite ici en suivant en fonction du temps la perte 

 progressive d'activite du lysozyme maintenu en presence de trypsine; cette methode 

 est en effet plus sensible que celle basee sur la mesure des produits d'hydrolyse. Toute- 

 fois, au cours d'experiences preliminaires realisees en mettant en oeuvre une concentra- 

 tion relativement elevee de lysozyme (8.5-io^^il/), de telle sorte que les produits d'hy- 

 drolyse formes soient en quantite appreciable, il a ete verifie que le dosage de ces pro- 

 duits d'hydrolyse fournit des resultats en parfait accord avec ceux donnes par la mesure 

 de I'activite lysante (Tableau I). 



TABLEAU I 



PROTEOLYSE PAR LA TRYPSINE DU LYSOZYME ACTIF, 



SUIVIE SOIT PAR LA DETERMINATION DE l'ACTIVITE RESIDUELLE (a) , 



SOIT PAR CELLE DES PRODUITS d'HYDROLYSE APPARUS (b) 



Lysozyme 8.5- 10^^ 717; Trypsine 5- io~^ M ; Ca++ lo"^ M* ; Temperature 36°. 



* Ca++n'ayant pas d'influence sur la proteolyse du lysozyme est ajoute pour stabiliser la trypsine. 

 ** Calculi a partir de la valour de I'extinctioii due au lysozyme total obtenue en substituant de 

 I'eau a I'acide tricliloraceticiue. 



Les experiences ulterieures portant sur Ic lysozyme actif mettent en oeuvre des 

 concentrations de lysozyme environ dix fois plus faibles, car nous avons observe que la 

 sensibilite du lysozyme vis a vis de la trypsine est d'autant plus forte que le lysozyme 

 est plus dilue. Ce fait, assez remarquable, mis en relation avec le fait que la stabilite du 

 lysozyme a I'inactivation thermique a 60"^ varie aussi dans le meme sens que la concen- 

 tration^, suggere deja I'existence d'un point commun dans le mecanisme d'action de la 

 chaleur et dans celui de la trypsine. 

 Bibliographic p. 288. 



