VOL. 12 (1953) MANGANESE ET LA ST.ABILITE DU LYSOZYME II 287 



inactivation thermique a porte sur du lysozyme ayant subi un traitement base sur les 

 considerations suivantes; les solutions de lysozyme a inactiver doivent etre suffisamment 

 concentrees pour fournir des valeurs convenables lors du dosage des produits d'hydro- 

 lyse, seule methode de mesure applicable ici. Or, de telles solutions a 60° ne s'inactivent 

 que lentement, alors qu'a des temperatures plus elevees, leur inactivation est accompa- 

 gnee d'une precipitation^. On est done amene a preparer une solution de "lysozyme 

 denature standard" en traitant a 70° pendant 60 minutes une solution de lysozyme ac- 

 tif 1.7-10-'* M dans du tampon borate a pH 7.9, puis en centrifugeant pour eliminer le 

 leger louche qui s'est forme; cette solution de "lysozyme denature standard" a conserve 

 environ 40% de son activite initiale. Pour mieux definir I'etat de denaturation d'une 

 telle preparation, il convient de savoir si dans la solution on a affaire a des molecules 

 ayant toutes subi une inactivation partielle, ou a un melange de molecules actives et de 

 molecules inactives; or, si on suit a 25° Taction de la trypsine (2-io~^ M) sur une telle 

 solution, on constate que la perte d'activite lysante et I'apparition de produits d'hydro- 

 lyse ne sont plus paralleles : alors que le premier phenomene ne se manifeste pratiquement 

 pas, meme apres six heures, les produits d'hydrolyse apparaissent des le debut pour 

 atteindre dans le meme temps 25% de ce qui correspondrait a I'hydrolyse de la totalite 

 du lysozyme present. II est done evident, que, dans les conditions realisees, les molecules 

 de lysozyme hydrolysees par la trypsine ne sont pas celles qui ont conserve leur activite. 

 De plus, ces dernieres molecules se comportent d'une fagon analogue a celle des mole- 

 cules du lysozyme actif : en effet, si on dilue la solution de "lysozyme denature standard"" 

 dans des proportions telles qu'on ait, en lysozyme actif, une concentration de io~^ M , 

 on observe en presence de trypsine io~^ M a 36° une vitesse d'inactivation tout a fait 

 comparable a celle obtenue avec une solution de meme concentration en lysozyme cris- 

 tallise actif. En presence de manganese io~^ M, aucune proteolyse n'est decelable meme 

 apres six heures. On est done conduit a considerer la solution de "lysozyme denature 

 standard" comme contenant approximativement 40% de molecules de lysozyme actif et 

 60% de molecules de lysozyme inactif. 



Ces observations jointes au fait qu'a 25° Taction de la trypsine sur le lysozyme actif 

 est pratiquement inexistante, indiquent que, quoique la solution de "lysozyme dena- 

 ture standard" consiste en un melange d'au moins deux especes de molecules, il est pos- 

 sible de Tutiliser pour etudier Taction de la trypsine sur le lysozyme inactive. 

 Cette etude montre que, en Tabsence de manganese ou de calcium, une solution de "lyso- 

 zyme denature standard" dont la concentration en lysozyme inactif est 9-10-^ M, est 

 hydrolysee par la trypsine 2 • lO""^ M suivant une reaction d'ordre zero (concentration du 

 substrat saturante) pendant les vingt premieres minutes de la reaction; 10% du substrat 

 sont alors hydrolyses [A extinction du surnageant trichloracetique apres 20 minutes = 

 0.130). En presence de manganese ou de calcium (io~^ M), cette proteolyse est accrue 

 d'environ 10%. Si la concentration du substrat, au lieu d'etre saturante, est limitante 

 (3.4'io-^M), la presence des metaux en question provoque un accroissement du meme 

 ordre de la proteolyse. Ainsi, contrairement a ce qui se passe dans le cas de la proteolyse 

 par la trypsine du lysozyme actif, la proteolyse du lysozyme inactif n'est pas diminuee 

 par la presence de manganese ; au contraire, ce metal, tout comme le calcium, favorise 

 Taction proteolytique en stabilisant la trypsine. 



Le fait que en presence de manganese la trypsine n'agit pas sur le lysozyme actif, 

 meme a 36°, permet de comparer a 25° et a 36° les vitesses de proteolyse par la trypsine 

 (2-10-'' M) du lysozyme inactif (9-10-^ M) en presence de manganese (io~^ M). Cette 



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