XXV, 2. Winivvarter-Sainmont: Über Flemiuing'sche Dreifärbung. 159 



tragen. Am besten läßt man dann sofort die aufsteigende Serie der 

 Alkohole einwirken und bettet in Paraffin ein, respektive man bewahrt 

 die Objekte in Paraffin und nicht in Alkohol auf. Wenn die Schnitte 

 erst nach mehreren Jahren angefertigt werden, so haben die Präpa- 

 rate ihr Färbungsverraögen einigermaßen eingebüßt. Neuerliches 

 Einlegen der aufgeklebten Schnitte in P'LEMMiNGSche Lösung^ Avie be- 

 reits oben erwähnt, beseitigt diesen Übelstand. 



Bei unserer eigentlichen Dreifärbung wird folgendermaßen ver- 

 fahren : 



1) Das Paraffin wird nicht über einer Spiritusflamme ge- 

 schmolzen, sondern einfach in zwei oder drei Xylolbädern bei gewöhn- 

 licher Zimmertemperatur sehr leicht aufgelöst. 



2) Auswaschen in einem Gemisch von Xylol und absolutem 

 Alkohol, dann in zwei verschiedenen Alk. abs., um sämtliche Spuren 

 von Xylol zu entfernen; 95prozentigen Alkohol und zuletzt in 65pro- 

 zentigem Alkohol. 



3) Dann kommen die Objektträger in Safranin während 

 24 Stunden. Je nach dem Safranin gebrauchen wir ^/„prozentige oder 

 einprozentige Lösung in 50^ Spiritus. (Die Stammlösung besteht 

 aus einprozentiger Safraninlösung in abs. Alkohol, welcher einige 

 Tropfen Anilinwasser zugesetzt Averden. Zum Gebrauch wird ein 

 gleiches Volumen destillierten Wassers beigemischt.) 



4) Mehrmaliges Abwaschen in destilliertem Wasser. 



5) Sodann werden die Schnitte in einprozentiges wässeriges 

 Gentian aviolett gebracht, ebenfalls während 24 Stunden. 



6) Wiederholtes Abwaschen in destilliertem Wasser. 



7) Eintauchen in eine wässerige Lösung von Orange G 

 während etwa einer Minute. Die Konzentration dieser Lösung hängt 

 ganz von dem zu färbenden Objekt ab. Alle embryonalen Stadien 

 oder Gewebe erfordern eine drei- oder viermal stärkere Konzentration 

 als die anderen. Das einfachste Mittel ist ein für allemal empirisch 

 diese Konzentration für ein bestimmtes Objekt festzustellen und unter 

 dem Mikroskop zu kontrollieren, da alle späteren Manipulationen den 

 Ton des Orange nicht mehr beeinflussen. 



8) Sechs bis acht Tropfen einer Mischung von gleichen Teilen abso- 

 luten Alkohols und reiner Salzsäure werden 100 cc absoluten Alko- 

 hols (ungefähr) beigemengt und die Schnitte in diese Flüssigkeit 

 (acidulierter Alkohol) getaucht. Beim ersten Auftreten von violetten 

 Wolken (nach 2 oder 3 Sekunden) werden die Schnitte sofort ent- 

 fernt und 



