II. Untersuchung von Boudiera. 

 a. Technik. 



Da der Erfolg der Arbeit in erster Linie von der Überwindung gewisser technischer 

 Schwierigkeiten abhängt, will ich bei der Schilderung der Technik etwas Länger verweilen, 

 als es neuerdings meist zu geschehen pflegt. Sehr einfach erledigte sich die Frage nach 



1 . dem Kultursubstrat. Ich verwandte ausschließlich sterilisierten Kaninchenkot für die 

 Rohkulturen und filtrierten Kaninchenkotdekokt meist mit, seltener ohne Agar-Agar für die Rein- 

 kulturen. Den Dekokt bereitete ich in der Weise, daß ich ein Becherglas von etwa 1 J / 2 1 Inhalt 

 bis zu J 3 seiner Höhe mit Kaninchenkot füllte, bis zu 2 / 3 Wasser nachfüllte und Glas mit 

 Inhalt ca. 1 Stunden im Dampftopf erhitzte. Nach dem Erkalten goß ich den ziemlich klaren 

 Dekokt vom Bodensatz ab, filtrierte ihn einmal unter Druck durch Watte und dann ohne 

 Druck durch ein gewöhnliches Filter. Das Filtrat wurde mit 1,8# sorgfältig mit Leitungs- 

 wasser ausgewaschenen Agars in einem emaillierten Topf über offener Flamme bis zur 

 Lösung des Agars gekocht, in ein Becherglas gegossen und dann 3 — 4 Stunden im Dampf- 

 topf erhitzt. Nach dem Erkalten läßt sich durch einen an der Becherglaswand entlang ge- 

 schobenen Glasstab der Agar mit Leichtigkeit herausheben. Man zerlegt ihn in dünne 

 Scheiben, aus denen man die trüben Stellen ausschneidet, um sie noch einmal derselben 

 Prozedur zu unterwerfen. Die klaren Agar-Agarmassen Averden in Kolben gefüllt und sind 

 nach mehrstündigem Sterilisieren verwendungsfähig. Auf diese Weise vermeidet man das 

 lästige und zeitraubende Filtrieren. Zusatz von etwas Monokaliumphosphat (0,05^) ist zu 

 empfehlen. 



2. Als Kulturgefäße benutzte ich größere Doppelschalen von 18 — 20 cm Durch- 

 messer und 5 — 7 cm Höhe (für Kaninchenkot als Substrat) und kleinere von 10 cm Durchmesser 

 und 1 cm Höhe (Nährboden Mistagar). Für die Beobachtung unter dem Mikroskop ließ 

 ich mir Kammern von der Art der Böttcher'schen ') anfertigen. Ihre Dimensionen wurden 

 so gewählt, daß die nutzbare Kulturfläche ohne Drehung der Kammern auf den Objekt- 

 tischen der größeren Zeiß'schen Mikroskope (bis Stativ IV einschließlich) gerade noch über- 

 sehbar war. Der Objektträger hat die Maße 60x80 mm, der aufgekittete Ring besitzt einen 

 äußeren Durchmesser von 50 mm. Zum Aufkitten der Ringe auf den Objektträger empfiehlt 

 sich eine Masse aus 2 Teilen Kolophonium und 1 Teil Wachs. Man schmelzt sie in einem 

 Blechgefäß auf offener Flamme, faßt den Ring mit einer Pinzette, taucht ihn in horizontaler 

 Lage 1 — 2 mm tief ein und befestigt ihn mit sanftem Druck am Objektträger. Durch einen 

 Blick von der Unterseite des Objektträgers überzeugt man sich, ob der Ring überall haftet. 

 Ein gut angekitteter Ring braucht bei der Reinigung des Objektträgers nicht entfernt zu 

 werden. Die Kittmasse hat einen so hohen Schmelzpunkt, daß eine ausreichende Sterili- 

 sierung der Kammern mit einem Bunsenbrenner möglich ist. In den oberen Rand der 

 Hinge ließ ich drei kleine Kerben einschleifen, nachdem ich die Beobachtung gemacht hatte, 

 daß der Pilz in gelüfteten Kammern besser wächst. Die Kulturen auf Agar-Agar wurden 

 bei ca. 25° C im Thermostaten gehalten. 



3. Die Reinzucht des Materials gestaltete sich nicht ganz einfach, da die Roh- 

 kultur mit schnellwachsenden Pilzen, besonders Mucorineen, und Bakterien stark verunreinigt 

 war. Ich impfte mit einem ausgeglühten Platindraht zunächst auf sterilen Kaninchenkot 

 über. Die Kultur war zwar reiner als die erste, aber immer noch stark mit anderen Pilzen 



1 Klöck'er I. 



