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Spore aus verfolgt, Die genauere Beobachtung geschah dann in der Weise, daß icK das 

 Deckglas mit dem Kultursubstrat von der Kammer abhob und ein zweites Deckglas von 

 gleicher Größe auf die Agarschicht auflegte. Kleinere Früchte und Fruchtanlagen werden 

 dadurch kaum oder gar nicht, größere Früchte ein wenig gequetscht. Präparate dieser Art 

 sind von einer Seite bei der stärksten Vergrößerung zu betrachten und wenigstens einen 

 Tag über brauchbar, oft sogar länger. Der Pilz ist so zählebig, daß er nach stundenlanger 

 Bedeckung mit einem Deckglase noch weiter wächst. 



Die Beobachtung des lebenden Objektes wurde durch Untersuchung fixierten und ge- 

 färbten Materials ergänzt. Als Fixierungsmittel verwandte ich nach einigem Probieren vor 

 allem die schwächere Flemming'sche Flüssigkeit, die Merkel'sche Flüssigkeit und die 

 vom Kath'sche Lösung II. In die Fixierungsflüssigkeiten eingetragen werden entweder 

 kleine, aus Agarnährböden in Petrischalen ausgeschnittene Stücke von etwa 25 qmm Fläche 

 oder Deckgläser mit der aufgegossenen Agarschicht. Für die einzelnen Fixierungsflüssig- 

 keiten gilt folgendes: 



a) Schwächere Flemming'sche Flüssigkeit: Dauer der Fixierung 10 Minuten, darauf 

 mehrstündiges Auswaschen mit fließendem Wasser, Übertragung in 35^ igen Alkohol und 

 Härtung in der gewöhnlichen Weise. Fixiert die Asci gut. Zur Fixierung von schraubigen 

 Initialorganen unbrauchbar *). 



b) Merkel'sche Flüssigkeit: Dauer der Fixierung ca. 2 Minuten, mehrmaliges Aus- 

 waschen mit 50^igem Alkohol, Härtung. Fixiert auch die Initialorgane gut 2 ). 



c) vom Rath'sche Lösung II, 1 -+- 20. Dauer der Fixierung bis 2 Minuten, gründ- 

 liches Auswaschen mit 50^igem Alkohol, Härtung 3 ). 



Die Einbettung in Paraffin kann nach den üblichen Methoden geschehen, nur muß 

 man etwas vorsichtiger als gewöhnlich verfahren und zu hohe Temperaturen (über 55° C) 

 sorgfältig vermeiden. Eingebettet wurde nur Material, das von Kulturen in Petrischalen 

 stammte. Objekte aus den feuchten Kammern wurden in toto gefärbt und gaben gute 

 Übersichtsbilder. Gleichmäßige Färbung eines ganzen Präparates läßt sich indessen nicht ' 

 erreichen, einmal wegen der ungleichen Dicke der Agarschicht und zweitens wegen des ver- 

 schiedenen Farbstoffspeicherungsvermögens der verschiedenen Teile des Pilzes. Außer- 

 gewöhnliche Schwierigkeit bietet die Färbung der Kerne in den schraubigen Initialorganen der 

 Fruchtkörper, auch an Mikrotomschnitten — ich verwandte für die jüngeren Stadien 5 jj.- und 

 1 ^-Schnitte, für die älteren 5 u-Sehnitte — , da ihr Plasma Farbstoffe sehr stark speichert. 

 Von den vielen von mir versuchten Färbungsmethoden ist das Flemming'sche Safranin- 

 Gentianaviolett-Orange G-Verfahren zur Färbung der Schraubenkerne geeignet, Die Heiden- 

 ham'sche Hämatoxylin-Eisenalaunmethode gibt gute Resultate, wenn man mit Eosin- 

 Nelkenöl gegenfärbt. Man beizt, färbt und differenziert in der gewöhnlichen Weise, wäscht 

 gut mit Wasser aus, entwässert mit Alkohol absolutus und überträgt für einige Minuten in 

 Eosin-Nelkenöl. Durch Xylol wird der überflüssige Farbstoff entfernt und das Präparat in 

 Dammar in Xylol eingeschlossen. Die Mycelkerne sind am schärfsten nach diesem Verfahren 

 darzustellen. Die Ascuskerne sind leicht zu färben, am besten nach dem Flemming'schen 

 Dreifarbenverfahren. 



Man färbt am vorteilhaftesten nach Flemming und Merkel fixiertes Material mit 

 Safranin-Gentianaviolett-Orange, mit vom Rath'scher Lösung fixiertes nach Heidenhai n. 



*) Lee und Mar er. S. 32. 4: 

 - Zimmermann (I), S. 3. 

 3 ) Zimmerman n [ . S. 7. 



