102 ANALES DE LA SOCIEDAD CIENTÍFICA ARGENTINA 



Este método, pues, exige muchos tauteos y no lleva necesariamente 

 al resultado apetecido; cuando lo logramos, muchas veces no podemos 

 comprobarlo, por las razones expuestas más arriba. Podemos emplear- 

 lo solamente en casos especiales, como por ejemplo : obtención de un 

 cultivo puro de Saecharomyces apiculatus partiendo de una mezcla de 

 éste y 8. ellipsoideus, pues el primero se desarrolla más rápidamente 

 y sus caracteres morfológicos permiten reconocerlo fácilmente. 



El procedimiento de Lindner, conocido bajo el nombre de cultivo 

 en gotitas (Tropfehenkultur)^lo he empleado del modo siguiente: una 

 fracción de un cultivo joven se diluye en un medio nutritivo en la 

 proporción de un décimo más ó menos, se agita perfectamente, y luego, 

 con un palito mondadientes cuya punta ha sido finamente aguzada 

 con una navaja y luego esterilizado en una caja dePétri se depositan 

 gotas sumamente pequeñas sobre un cubreobjeto, también esteriliza- 

 do, el que se invierte sobre un portaobjeto con una concavidad cen- 

 tral, teniendo la precaución de pegar los bordes del cubreobjeto con 

 vaselina esterilizada ; luego se cuenta al microscopio el número de 

 células que hay en cada gota, se saca el término medio y se conoce 

 de este modo la dilución que será necesario emplear para que en 

 cada gota exista una sola célula; obtenida la dilución conveniente. 

 se procede otra vez del mismo modo colocando 3 X 3 ó bien 4x4 

 gotas sobre un nuevo cubreobjeto y luego se examina detenidamente 

 con el microscopio cada una de estas gotitas, que se tieue espe- 

 cial cuidado de hacer del mismo tamaño que en el primer ensayo ; las 

 gotas que contienen una sola célula se marcan con tinta con un pequeño 

 circulito y luego se coloca toda la cámara húmeda en la estufa á 25°; 

 las levaduras se multiplican, y á las 48 horas cada una de las gotitas 

 que contenían una sola célula, se encuentra poblada por un gran nú- 

 mero de éstas; entonces se levanta el cubreobjeto y, con un pequeño 

 papel de filtro cortado en forma de triángulo, esterilizado y tomado 

 con una pinza pasada por la llama, se absorbe una de las pequeñísimas 

 gotas que en el origen tenían una sola célula, y se coloca en un tubo 

 con mosto aséptico; por último se observa al microscopio si en la ope- 

 ración no se ha tocado alguna otra gota cercana; en caso negativo 

 podemos tener la seguridad que poseemos un cultivo puro. 



Este ingenioso procedimiento es uno de los pocos que pueden dar- 

 nos una seguridad absoluta, pero exige el empleo de medios de cultivos 

 y de aparatos que no contengan ningunas partículas extrañas, las que 

 dificultan enormemente la observación, por lo cual creo que es prac- 

 ticable únicamente cuando se trata de un pequeño número de culti- 



