ESTUDIO DE LAS LEVADURAS DE MENDOZA 103 



vos; pero como be operado con un gran número de éstos, me lie visto 

 obligado ¡i abandonar este método y substituirlo por otro, que si bien 

 es cierto, es mucho más largo, es en cambio más practicable ; me refiero 

 al método de las diluciones sucesivas en un medio gelatinizado, y 

 desarrollo en cajas de Pétri. 



El cultivo que se desea purificar se agita enérgicamente para, obte- 

 ner una suspensión homogénea; luego se sumerge en él un alambre de 

 platino esterilizado, en una longitud de un centímetro; se pasa luego 

 por un primer tubo con mosto gelatinizado, y con una pipeta Pastear 

 se toman diez ó doce gotas que se pasan aun segundo tubo; se vierte 

 el contenido de ambos tubos en dos cajas de Pétri; para activar el 

 desarrollo lie colocado las cajas en la estufa á 22°. Al cabo de cinco 

 días las colonias tienen un diámetro de un milímetro ; entonces se 

 transplanta una de ellas en un medio nutritivo. De esta manera se ha 

 practicado una primera purificación. 



Esta operación la lie repetido dos veces más, llegando así á cuatro 

 el número de aislamientos sucesivos. 



Pasaré ahora á hacer la crítica (íe este método. Las investigaciones 

 de Hansen, Miquel y Holm pusieron de manifiesto que una dilución 

 de gérmenes perfectamente agitada, no siempre conduce á una sepa- 

 ración completa de éstos; en consecuencia un cierto número de colo- 

 nias pudieran estar formadas por la reunión de dos ó más especies ó 

 razas si el cultivo primitivo no es puro. Holm demostró que para las 

 levaduras este número es como máximo de un décimo, suponiendo 

 que dos levaduras se encuentren en igual número en el cultivo primi- 

 tivo ; se comprende fácilmente que si una de las dos predomina, exis- 

 ten aún menor número de probabilidades para que una colonia tomada 

 al azar resulte impura. 



Es fácil calcular que al cuarto aislamiento las probabilidades para 

 que los cultivos sean aún impuros, son menores de uno por diez mil, 

 lo que en este caso equivale á decir que prácticamente los cultivos 

 son perfectamente puros. 



IDENTIFICACIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE LAS DISTINTAS LEVADURAS 



Tenemos ahora nuestros cultivos perfectamente puros, pero debe- 

 mos suponer que habrá muchas levaduras iguales entre sí; se trata, 

 pues, de eliminar las que se encuentran repetidas, para lo cual he 



