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 dans un thermostat, maintenu à la température constante de + 43°, pour 

 le développement de la semence en mycélium fragmenté dépourvu de 

 spores; 3° chauffage de la culture pendant trois heures dans un thermostat 

 à + 47°» chauffage destiné à produire l'atténuation de la virulence du 

 mycélium. La culture est alors prête à servir de semence pour un grand 

 nombre d'autres cultures de deuxième génération, qui seront appliquées 

 aux inoculations préventives. Cette seconde partie de l'opération se décom- 

 pose dans les temps suivants : i° ensemencement des nouveaux matras 

 avec une ou deux gouttes de la première culture atténuée; 2° exposition 

 pendant cinq à sept jours dans un thermostat à + 35°-37°, pour le déve- 

 loppement du mycélium et sa transformation en spores déjà atténuées ; 

 3° chauffage à + 8o° pendant une heure pour compléter l'atténuation des 

 spores. 



» Je rappellerai encore que la culture de première génération peut aussi 

 fournir directement ces spores atténuées, quand on la soumet à la tempé- 

 rature eugénésique après le chauffage à -f- 47°- 



» Voilà les principes; mais ce sont les conditions d'application qui im- 

 portent à la réussite des opérations. J'ai étudié ces conditions avec soin, et 

 je vais passer en revue successivement tous les points qui ont fait l'objet 

 de mes recherches, tant sur la préparation des cultures que sur leur mode 

 d'emploi. 



» Comme milieu de culture, je continue à me servir de bouillon de 

 poulet léger et clair, préparé avec une partie de viande au plus pour cinq 

 parties d'eau. Un milieu plus riche m'a paru moins apte à la réussite de 

 l'atténuation. 



» Pour obtenir la semence, je féconde toujours le matras où elle doit se 

 faire avec du sang frais de cobaye et je ne prolonge jamais la culture au 

 delà de vingt heures, la température étant maintenue aussi exactement que 

 possible à -H 43°. L'expérience m'a enseigné que c'est dans la période 

 comprise entre la douzième et la vingtième heure de la culture que le my- 

 célium fragmenté qui en résulte est le mieux disposé à subir l'atténuation 

 par le chauffage rapide. Souvent alors le mycélium est peu abondant, 

 mais ce n'est pas une condition défavorable à l'utilisation de la culture. 



» C'est à la température de -f- 47° que j'expose pendant trois heures le 

 mycélium de cette culture pour y déterminer l'atténuation fondamentale. 

 Il ne faut jamais descendre au-dessous de cette température, mais on peut 

 sans inconvénient, peut-être même avec un certain avantage, monter jus- 

 qu'à 4- 49°. 



