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K. E. WOHLFARTH-BOTTERMANN 



since with osmium fixed tissue any staining has to be 

 extremely intense to show over the background of 

 osmium staining produced during fixation. Attempts 

 to remove the osmium from osmium fixed tissue 

 without losing the quaUty of fixation have not as 

 yet been successful. 



Osmium stainini^ after acetic acid fixation. — Fig. 1 

 shows a preparation of locust testis fixed in 45 % 

 acetic acid made isotonic with 0.9 "o sodium chloride; 

 the section was stained in osmium tetroxide for 

 half an hour. Fig. I a shows an area in which the 

 sperm tails are cut in approximate transverse section. 

 Comparison with the reference area shows that the 

 9 + 2 fibres in the tails stain much more strongly 

 than the surrounding protoplasm. This is presumably 

 due either to a higher concentration of dry mass in 

 the fibres or else to some kind of specific affinity for 

 osmium tetroxide possessed by the fibres after acetic 

 acid fixation. Figs. 1 b and c show longitudinal sec- 

 tions of sperm tails. 



Osmium staining after formaldehyde fixation. — 

 Locust spermatocytes fixed in 5 % of buffered 

 formaldehyde and section-stained with osmium tetr- 

 oxide show a peculiar region of specially intense 

 staining between the stained and unstained areas. 

 This region was presumably subjected to a slight 

 irradiation prior to staining; its significance is not 

 yet understood (fig. 2). 



Lanthanum staining after acetic acid fixation. — An 

 example of the staining of chromatin appears in 

 fig. 3, which shows part of a locust spermatocyte 

 nucleus fixed in isotonic 45 % acetic acid and sec- 

 tion-stained with lanthanum nitrate. The unstained 

 chromatin shows no structure; the stained chromatin 

 not only appears darker, but also shows a compli- 

 cated form of organised structure. 



One of us (I. R. G.) gratefully acknowledges receipt 

 of a maintenance grant from the Department of Scientific 

 and Industrial Research during the period of this work, 

 and of a grant from King's College, Cambridge, to 

 enable him to travel to the Conference. 



Die Eignung und Anwendung von Phosphorwolframsaure 

 Lind Thalliumnitrat als Kontrastmittel zur Darstellung cytoplasmatischer 



Strukturen 



K. E. WOHLFARTH-BOTTERMANN 



ZerUral-Lahoratoritini fiir angewandte Ubermikroskopie der Universitcit Bonn 



Obwohl bereits mehrere allgemeine und spezifische 

 Kontrastmittel vorgeschlagen worden sind (1-4, 6), 

 haben diese jedoch noch keinen Eingang in die all- 

 gemein gebriiuchliche Praparationstechnik gefunden. 

 Die Ursache kann darin vermutet werden, daB 

 bisher nicht der Nachweis gefiihrt wurde, daB die 

 betreffenden Kontrastmittel ohne EinfluB auf die 

 Giite der Strukturerhaltung sind. Dieser Nachweis 

 liiBt sich nur durch vergleichende Untersuchungen 

 bei hohen elektronenoptischen Abbildungsstufen 

 erbringen. 



Die allgemein iibliche Normaltechnik ist heute 

 cine Fixierung in gepufferter, isotonischer l-2%iger 

 Osmiumtetroxydlosung (5, 7). Es soil hier gezeigt 

 werden, daB sich diese Normaltechnik durch rou- 

 tinemiiBige Verwendung von Kontrastmittein ver- 

 bessern laBt. 



AnliiBlich von Schnittuntersuchungen an Proti- 

 sten- und Siiugerzellen wurden verschiedene Stoffe 

 auf ihre Eignung zur besseren Darstellung von Zell- 

 strukturen iiberpriift. Hierbei ergab sich eine vorteil- 

 hafte Anwendungsmoglichkeit von Thallium(l)nitrat 

 (TINO,) und Phosphorwolframsaure (?.<0,1AV^0, 

 + X H,0), im folgenden jeweils als Tl bzw. PWS 

 bezeichnet. PWS ist bekanntlich ein vorziigliches 

 Kontrastmittel fiir FasereiweiBe wie z. B. Kollagen 



und Muskulatur. Es stellte sich heraus, daB PWS 

 bei geeigneter Anwendung auch mit Erfolg bei cyto- 

 logischen Untersuchungen benutzt werden kann. 



Losungen von PWS reagieren stark sauer und fiih- 

 ren ohne besondere VorsichtsmaBnahmen zu Struk- 

 turveriinderungen in der Zelle. Dieser Nachteil der 

 PWS konnte vollstandig vermieden werden, indem 

 sie ebenso wie Tl zu I % in 70°oigem Alkohol gelost 

 wurde. LaBt man eine solche Losung wahrend des 

 Entwasserungsprozesses, eben auf der Stufe des 

 70%igen Alkohols in das Objekt eindringen, so wird 

 der Kontrast der Objekte befriedigend gesteigert, 

 wahrend Strukturveranderungen im Objekt nicht 

 auftreten, wie die Abb. 1-2 belegen. Die gute kon- 

 traststeigernde Wirkung der PWS wurde sowohl an 

 Protozoen- als auch an Saugerzellen iiberpriift. Tl 

 gelangte nur an Protozoen zur Erprobung. Die 

 Abb. 1-2, die selbstverstiindlich unter vergleichbaren 

 Bedingungen aufgenommen und phototechnisch ver- 

 arbeitet wurden, zeigten deutlich in der Gegeniiber- 

 stellung von Osmium-Fixation (Abb. I) und Os- 

 mium-Fixation + Kontrastierung (Abb. 2) die Uber- 

 legenheit der Abbildung zusiitzlich kontrastierter 

 Objekte. Schnitte: Ultramikrotom nach Sjostrand. 

 Aufnahmen: Siemens-Ubermikroskop Typ 100 d, 

 80 kV. 



