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IX. Alotluxic (i"t'\tra«'lioii de la tyrosiiiasc. 



Dans le bul d'obtenir du ferment purifié plus actif et en plus 

 grande quantité, nous avons essayé de modifier la méthode habi- 

 tuelle. Nous comparons ici brièvement la méthode habituelle 

 et celle que nous avons étudiée. 



A partir des champignons. 



A. Méthode générale. 



Broyer le champignon sec ou frais, avec un peu d'eau, laisser 

 macérer quelques heures, après addition de toluol, filtrer après 

 décantation, précipiter le liquide obtenu par de l'alcool à 90'^o- 

 Laisser reposer le liquide alcoolicpie, filtrer le dépôt et le mettre 

 sécher sur une plaque de verre. 



Critique de cette méthode : 



Nous avons vu que le suc des champignons contient, parmi beau- 

 coup d'autres substances, celles qui nous intéressent ici: des acides 

 aminés. Il est naturel de penser que la tyrosinase et ces acides 

 entrent en réaction et que, de ce fait, la tyrosinase peut être 

 affaiblie ou son rendement diminué. 



On sait, d'autre part, que l'acidité du milieu entrave l'action de 

 la tyrosinase. Nous avons alors essayé l'extraction de ce ferment 

 en milieu acide. 



Extraction acide : 



Le champignon est séché, puis broyé avec de l'eau acidulée par 

 l'acide acétique de façon à ce que le milieu contienne 0,04% d'acide. 

 Le tout est mis à macérer après addition de toluol, pendant quelques 

 heures, le liquide décanté, filtré, et le filtrat précipité par l'alcool 

 à 90%. Le précipité est séché comme précédemment. 



Le rendement comparé à celui d'une extraction aqueuse est, 

 suivant les cas, de trois à quatre fois plus grand. 



L'activité de ce ferment a été mesurée et comparée à celle d'une 

 tyrosinase habituelle, de Lactarius vellereus également. La méthode 

 utilisée pour cela est celle de Bach. Le substrat employé est la 

 tyramine. 



Disposition des expériences : 



Dans de petits erlenmeyers de 100 ce, je mets : 

 1 ce solution de tyramine à 0,5 % 

 1 ce solution de ferment à 0,3% 

 3 ce d'eau distillée. 



Je laisse agir pendant le temps voulu, arrête la réaction du fer- 



