■2ii5 BOLETÍN DE LA REAL SOCIEDAD ESPAÑOLA 



no fuese demasiado grande, obtuvimos la colaboración del profesor 

 auxiliar de Análisis Químico de esta Facultal de Ciencias, Sr. Fer- 

 nández Benedid, quien ha practicado la mayor parte del trabajo ana- 

 lítico de que damos cuenta. 



Los caldos de cultivo que hemos empleado son los medios líquidos 

 manitados, preparados según detallamos en la segunda comunica- 

 ción; los cultivos puros empleados son los de Bacillus radicicola, 

 Clostridiam Pasteurianum y Azotobacter chroococcam, cuyo 

 aislamiento y caracteres quedaron consignados en las comunicacio- 

 nes segunda y tercera. Para añadir á cada cultivo la cantidad co- 

 rrespondiente del ion metálico, hicimos unas disoluciones valoradas 

 de cloruro manganoso y de cloruro férrico á tal concentración, que 

 1 c. c. de cada una de estas disoluciones contuviera respectivamen- 

 te 0,001 gramos de manganeso ó de hierro. 



Realizamos con cada uno de los metales y para cada uno de nues- 

 tros cultivos diversas series de experiencias, porque en unas se 

 inutilizó alguna determinación cuantitativa de nitrógeno, y en otras 

 se obtuvieron números que necesitaban comprobación. En todos los 

 casos operamos del modo siguiente: en varios matraces Erlenmeyer 

 iguales, colocamos 100 c. c. de un mismo caldo de cultivo y esteri- 

 lizamos al autoclave. El contenido de uno de estos matraces se eva- 

 poraba á sequedad en baño de maría, y sobre el residuo se hacía 

 una determinación de nitrógeno total por el método de Kjeldahl, 

 empleando para valorar el amoníaco un ácido sulfúrico valorado del 

 que 1 c. c. equivale á 0,00134 gr. de nitrógeno amoniacal. A los 

 restantes matraces se les adicionaron dosis crecientes de la corres- 

 pondiente disolución valorada y se añadió después la cantidad nece- 

 saria á cada uno de ellos, de solución de hidróxido sódico, para que 

 en todos tuviera el líquido reacción débilmente alcalina. 



Realizado el trabajo en estas condiciones, creemos que quedan 

 anuladas una porción de causas de error que actúan principalmente 

 sobre la actividad del microbio; son las más importantes de estas 

 causas: a) la superficie del caldo, que como ya demostramos en 

 las comunicaciones segunda y tercera, influye en la cantidad de 

 nitrógeno absorbido; operando en vasijas iguales y con iguales vo- 

 lúmenes de caldo, tendremos superficies iguales; b) la alcalinidad 

 del medio, condición que requiere para su vida cada uno de estos 

 microrganismos, y como las disoluciones salinas empleadas presen- 

 tan reacción acida por la hidrólisis de la sal disuelta, se evita esta 

 causa de error, añadiendo á cada uno de los matraces la cantidad de 



