208 BOLETÍN DE LA REAL SOCIEDAD ESPAÑOLA 



meros que representen la exactitud propia de los métodos experi- 

 mentales que empleamos, hemos de citar al dar cuenta de nues- 

 tras investigaciones. 



Winogradsky, Kayser, Fermi, Beijerinck, entre otros, han reali- 

 zado diversas investigaciones sobre el cultivo y trabajo del Clos- 

 tridium, referentes algunas de ellas á la determinación de la canti- 

 dad en peso de materia hidrocarbonada (azúcar), que destruía este 

 microrganismo para absorber 0,001 gr. de nitrógeno atmosférico; 

 otras, á la relación en que deben encontrarse la materia hidrocarbo- 

 nada y el nitrógeno amoniacal ú orgánico en presencia para que el 

 cultivo absorbiera nitrógeno atmosférico, etc., pero ningún trabajo 

 hemos podido encontrar en el que se oriente el estudio de la fijación 

 del nitrógeno atmosférico por el Clostridium, en el sentido de ex- 

 plicar por una acción catalítica este importantísimo fenómeno. 



Azotobacter chroococum. 



Como tipo de microrganismos aerobios que poseen la propiedad 

 de fijar en las tierras el nitrógeno atmosférico, con el que, y en con- 

 currencia con los hidratos de carbono, forman moléculas nitrogena- 

 das, se citan los Azotobacter, y dentro de este grupo se cuentan 

 varias especies que ya hemos citado, pero entre ellas nos referire- 

 mos ahora al aislamiento, cultivo y estudio del Azotobacter chroo- 

 cocum. 



El método práctico y sencillo que utilizamos es muy semejante al 

 recomendado por Beijerinck. En un matraz Erlenmeyer de 300 c. c. 

 de cabida, colocamos 100 c. c. de agua filtrada que contiene 

 2 gr. de manita y 0,02 gr. de fosfato potásico primario; se este- 

 riliza al autoclave este medio líquido de cultivo, y se diluye después 

 en él 0,25 gr. próximamente de tierra de cultivo, tomada á unos 

 5 cm. de la superficie del terreno. Llevado el matraz á la estufa á 

 la temperatura de 22°, al cabo de unos días después de hecha la 

 siembra, aparece en la superficie del líquido un velo blanco, no vis- 

 coso, frágil, que pasado más tiempo se convierte en una capa blan- 

 ca que se rompe con un hilo de platino. Cuando esta capa blanca 

 comienza á formarse, y mejor todavía á las veinticuatro horas de 

 aparecer el velo, se observa al microscopio y se la ve formada por 

 una gran cantidad de microrganismos, entre los cuales muchos per- 

 tenecen al grupo de los Azotobacter., y entre ellos destaca por su 

 mayor abundancia el Azotobacter chroococum en forma de un di- 

 plococo muy característico de 0,005 mm. de diámetro y 0,009 de 



