210 BOLETÍN DE LA REAL SOCIEDAD ESPAÑOLA 



ter absorbe, y encontramos después de repetidas experiencias que 

 en el caldo, tipo de cultivo que empleamos, el Azotobacter se mul- 

 tiplica, pero no cumple su función asimiladora de nitrógeno. 



Este hecho debió ser observado por Beijerinck, porque á propó- 

 sito de este microrganismo, dice que sólo absorbe nitrógeno cuando 

 vive asociado al Bac. radiobacter ó al Aerobacter aerogenes. 

 Freudenreich afirma, como consecuencia de sus investigaciones, 

 que los Azotobacter aislados son aptos para asimilar nitrógeno at- 

 mosférico mientras tengan á su disposición las materias hidrocarbo- 

 nadas que necesitan para su vida. Como resultado de nuestras in- 

 vestigaciones, podemos afirmar que el Azotobacter chroococum 

 no necesita vivir en simbiosis con otros microrganismos para absor- 

 ber nitrógeno del aire ni le basta para absorberlo en cultivo puro la 

 presencia de las materias hidrocarbonadas necesarias para su vida; 

 en estas condiciones, el Azotobacter vive y se multiplica, pero no 

 realiza su función asimiladora de nitrógeno. 



Por consideraciones análogas á las que nos indujeron á realizar 

 con el cultivo de Clostridriutn las experiencias ya citadas, busca- 

 mos un catalizador apropiado entre los elementos que normalmente 

 se encuentran en las tierras de cultivo y, operando en presencia del 

 hierro-ión, logramos que nuestro cultivo de Azotobacter absorbiera 

 notables cantidades de nitrógeno por adición al cultivo de 0,003 

 gramos por 100 de Fe - " en forma de una disolución valorada de 

 Fe CL). Como experiencia tipo entre varias, citamos la siguiente: 

 Caldo de cultivo manitado al 1 por 100, 0,003 gr. por 100 de Fe*" 

 en la forma ya dicha, y adición de dos ó tres gotas de disolución de 

 hidróxido sódico, para que el líquido posea reacción débilmente al- 

 calina. 



Gramos. 



Nitrógeno total del caldo antes de la siembra, por 100 0,0290 



ídem id. á los veinte días de cultivo, por 100 0,0391 



Nitrógeno atmosférico fijado 0,0101 



Hay que advertir que la superficie que presentaban los 100 c. c. 

 de caldo con que operamos era de 120 cm-, y que en este caso, 

 como en los antes citados, la cantidad de nitrógeno absorbido por 

 una misma masa de caldo de cultivo, aumenta con la superficie que 

 presenta. 



Otra consecuencia importante se deduce de nuestras experiencias 

 sobre el Azotobacter chroococum. Cuando sembramos de nuestro 



