"FREEZE-SUBSTITUTION" METHODES 



POUR LA PRÉSERVATION 



DES STRUCTURES INTRACELLULARES 



ET DES ACTIVITÉS ENZYMATIQUES OU ANTIGENIQUES 



L. ORNSTEIN, B. J. DAVIS, P. TALEPOROS et S. KOULISH 



The Mount Sinai Hospital, New York City, U.S. A. 

 (Le papier sera présente par le Docteur Léonard Ornstein) 



Préparées avec soin par "Freezing-drying" ou par "Freezing-substitu- 

 tion", des coupes de tissu montrent une préservation remarquable de dé- 

 tails intracellulaires dans les couches externes de cellules, a condition 

 qu'elles n'aient pas été en contact avec de l'eau avant de les étudier. 

 (La cellule vivante, vue à travers une grande ouverture dans un micro- 

 scope a contraste de phase, est employée comme cadre de référence mor- 

 phologique.) 



Le traitement de telles cellules sèches, bien préservées, avec certains 

 ré'actifs anhydres, stabilise les protéines de sorte qu'une exposition des 

 milieux ultérieure à l'eau ne détruira pas la structure délicate. 



L'exposition des tissus secs aux reactifs tels que 1 'OSO4 a 2%, le 

 CljHg a 5% ou l'acide ATC dans des solvants anhydres tels que l'acéto- 

 ne, la diméthylformamide et certains alcools, a basse température (—15 

 à — 75°C), aboutit a des différences assez grandes des vitesses d'insolu- 

 bilisation de plusieurs protéines, comparées avec la vitesse d'inactiva- 

 tion de l'activité' de leurs sites enzymatiques et antigeniques, tels que 

 les deux procédés peuvent être facilement séparés; la fixation précède 

 l'inactivation. 



La "Freeze-substitution" est suivie tout d'abord d'un temps bien 

 contrôlé de fixation a basse température avec les reactifs indiqués et 

 ensuite d'un enrobage et de fabrication de coupes par les moyens habi- 

 tuels, au niveau des coupes on note une préservation excellente de la mor- 

 phologie des tissus et une activité' assez abondante des enzymes et des 

 substances antigeniques. 



Des microphotographies des hydrolases cellulaires et des coupes 

 traitées par la technique de Coons seront démontrées. 



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