A. NIZET ET A. HERVE 



{c) Preparation de Vhemine et de la globine 



Hernine—\2 a 15 cm-'^ de puree globulaire est additionnee d'un volume egal 

 de solution a 1 p. 1000 de glycine ou de DL-phenylalanine dans le chlorure 

 sodique 9 p. 1 000 et la suspension globulaire versee dans 5 volumes d'acide 

 acetique sature de chlorure sodique et chauffe a 95' C (Nencki et ZaleskiII). 

 La temperature est ramenee a 95° G et maintenue a ce niveau pendant 

 5 minutes. Le liquide est filtre rapidement sur ouate et abandonne a la 

 temperature du laboratoire. Apres 24 heures, les cristaux d'hemine sont 

 separes par centrifugation, laves successivement une fois a I'eau, une fois 

 dans une solution aqueuse a 1 p. 1000 de phenylalanine ou de glycine, 2 fois 

 a I'eau, 1 fois a I'alcool ethylique a 95° C, 1 fois a I'ether, et seches sur 

 chlorure calcique dans le vide. 



(rf) Mesures de radioactivite 



Les mesures de radioactivite de I'hemine et de la globine se font en double, 

 apres combustion par vole seche, sur sources epaisses de BaCOg, au compteur 

 de Geiger-Miiller a courant d'helium-isobutane. 



On trouvera dans les publications anterieures de I'un de nous (^2, le-is^ 

 des details complementaires sur la preparation, I'hygiene et la dietetique 

 des chiens, ainsi que sur les techniques d'etude de la synthese de I'hemo- 

 globine in vitro. 



[e) Conduite des experiences 



Du sang heparine et glucose est preleve aux chiens soumis a I'anemie 

 hemorragique et partage en plusieurs parties, de 50cm=^ chacune lorsqu'il 

 s'agit de preparer I'hemine, de 5 cm^ dans le cas de la globine. La premiere 

 partie, non irradiee, sert de reference ; la deuxieme est irradiee in vitro 

 (20.000 a 1 00.000 r). D'autre part, I'animal est irradie in toto a la dose de 

 500 r et du sang est preleve |h a 1 h apres I'irradiation. Tons les echan- 

 tillons de sang sont soumis a la centrifugation et le sang preleve apres irradia- 

 tion (eventuellement dilue par rapport au temoin par suite de la soustraction 

 sanguine precedente) est ramene au meme volume globulaire par sous- 

 traction de plasma. Dans certaines experiences, le culot de globules rouges 

 preleves avant irradiation du chien et debarrasses du plasma est additionne 

 de plasma de I'animal irradie. Dans d'autres experiences enfin, des globules 

 intacts sont respectivement mis, dans les memes conditions, en presence 

 de plasma intact et de plasma irradie in vitro a 20.000 r. Les hematics 

 sont remises en suspension, saturees d'oxygene par agitation prudente, et 

 les difTerentes fractions sont additionnees de glycine-2-"C ou de DL-3-pheny- 

 lalanine-2-i^C* aux memes concentrations dans tous les echantillons. La 

 radioactivite est mesuree, apres incubation, dans la globine et dans I'hemine. 



{f) Donnees sur les conditions d'' irradiation 



A titre d'exemple, nous donnons ici un protocole : 



Exp. No. it'^— Irradiation du chien in toto (500 r) : 200kV— 18nx.A— 

 filtre de cuivre de 0,5 mm — distance focale 180 cm — champ 50x30 cm — 

 duree 15 minutes. 



* Glycine fournle par le Radiochemical Centre, Amersham, Bucks., Angleterre ; activite 

 specifique 46,7 microcuries par mg. Phenylalanine fournie par Tracerlab, Boston, Mass., 

 U.S.A. ; activite specifique 0,31 millicurie/millimole. 



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