Über die Kristallisation von Gärungsfermenten und ihre optischen Teste 59 



sind, bei 0° jahrelang ohne Wirkungsverlust aufbewahren. Die Unbeständigkeit 

 der Fermente ist eine Schwierigkeit, die überwunden ist.* 



Will man ein Gärungsferment für katalytische Versuche benutzen, so kommt es 

 darauf an, daß die andern Gärungsfermente entfernt worden sind; daß also zum 

 Beispiel das oxydierende Gärungsferment frei ist von Isomerase und Zymohexase, 

 die Enolase frei ist von Mutase usw. Der hierfür erforderliche Reinheitsgrad ist 

 meistens nach einmaligem Umkristallisieren erreicht. 



Dagegen ist ein höherer Reinheitsgrad und vielfaches Umkristallisieren er- 

 forderlich, wenn man die stöchiometrischen Reaktionen der Fermente, auf denen 

 ihre katalytischen Reaktionen beruhen, untersuchen will. Dann sind wegen des 

 großen Molekulargewichts der Fermente und wegen des kleinen Molekulargewichts 

 der Wirkungsgruppen die reinsten Fermente noch zu unrein und Verunreinigun- 

 gen von 0,1 % 3 in der gewöhnlichen Chemie eine erlaubte Fehlergrenze, können 

 Wirkungsgruppen vortäuschen oder die Entdeckung von Wirkungsgruppen ver- 

 hindern. 



Nach dem Gesagten ist es auch klar, daß die Elementaranalyse keine Methode 

 ist, mit der das Problem der Wirkungen der Fermente untersucht werden kann. 

 Doch haben wir wegen der Klassifizierung der Ferment-Proteine unsere Kristalle 

 analysiert; die Ergebnisse sind in den Originalarbeiten mitgeteilt. Erwähnenswert 

 ist, daß wir in den meisten Fermentproteinen etwa 1 % Schwefel, in dem Enolase- 

 protein aber nur 0,38 % Schwefel fanden. 



Die Ultraviolett-Banden der Fermentproteine, die von dem Tryptophan und 

 dem Tyrosin der Proteine herrühren, fanden wir von bemerkenswert gleicher 



Höhe, Zum Beispiel : molarer Absorptionskoefficient bei 280 m// 



cm- 



Zymohexase aus Muskeln 2,0 10 :! 



Enolase-Protein aus Hefe 2,06 10 ;! 



Protein des oxydierenden Gärungsferments aus Hefe 2,16 10 :J 



VI. Kristallisation des Proteins des oxydierenden Gärungsferments 7 



Das Protein des oxydierenden Gärungsferments ist 1939 aus Hefe mit Hilfe des 

 optischen Tests 3 isoliert worden. Zwei neue für die Fermentchemie wichtige 

 Methoden sind dabei entwickelt worden: die Fraktionierung von Ferment-Pro- 

 teinen als Nukleoproteide durch Variation der Konzentration der Wasserstoffionen 

 und die Kristallisation von Ferment-Proteinen aus Ammonsulfat unter Zusatz von 

 starkem Ammoniak. 



Wie die meisten Ferment-Proteine ist auch das Protein des oxydierenden 

 Gärungsferments in Wasser sehr leicht löslich, während die Nukleinsäurever- 

 bindung, die etwa 20% Nukleinsäure enthält, in salzarmem Wasser bei saurer 

 Reaktion fast unlöslich ist. Befreit man also Hefesaft, der in der Regel reichlich 



* Zusatz 1961. Im wesentlichen nach diesen Methoden werden die reinen Stoff- 

 wechselfermente gewonnen, die C. F. Böhringer (Mannheim -Waldhof), sehr zum 

 Nutzen der Wissenschaft, seit einigen Jahren in den Handel bringt. 



