58 Über die Kristallisation von Gärungsfermenten und ihre optischen Teste 



Es entsteht also, wenn die Glukose zu Monophosphat phosphoryliert wird, 

 Lichtabsorption bei 340 m/>, und aus der Geschwindigkeit, mit der dies ge- 

 schieht, kann man die Wirksamkeit des ersten phosphorylierenden Ferments 

 berechnen. 



Mit der gleichen Hilfsreaktion haben wir die Mutierung des Coriesters 



l-Phosphoglukose 5± 6-Phosphoglukose 



optisch nachgewiesen. Die Komponenten des Tests waren dabei Coriester, 

 Triphospho-Pyridinnukleotid, Magnesiumsulfat und Zwischenferment. Bei Zu- 

 satz des Mutase-Proteins entstand dann Lichtabsorption bei 340 m/t. 



11. Zweites phosphory Her ende s Ferment. 



Um die Phosphorylierung von Hexosemonophosphat zu Hexosediphosphat optisch 

 nachzuweisen, fügen wir Zymohexase, Arsensäure und oxydierendes Gärungs- 

 ferment zu den Testlösungen hinzu. Sind die beiden Hilfsfermente im Überschuß, 

 so wird das entstehende Hexosediphosphat sofort gespalten, und die Aldoform des 

 Triosephosphats wird sofort zu Phosphoglycerinsäure oxydiert, wobei Dihydro- 

 pyridinnukleotid, also Lichtabsorption bei 340 m/t entsteht. Aus der Geschwindig- 

 keit, mit der diese Lichtabsorption zunimmt, kann man die Wirksamkeit des 

 phosphorylierenden Ferments berechnen. 



Die Komponenten des Tests sind also Hexosemonophosphat, Magnesiumsulfat 

 und Adenosintriphosphat ; und als Hilfssystem Zymohexase, Pyridinnukleotid, 

 Arsensäure und Protein des oxydierenden Gärungsferments. Gibt man zu dieser 

 Lösung, die reaktionslos ist, Protein des zweiten phosphorylierenden Ferments, so 

 entsteht Hexosediphosphat, und die Spaltung und die Oxydation der Spaltungs- 

 produkte beginnt. 



12. Carboxylase. 



Der Vollständigkeit wegen sei erwähnt, daß man auch Carboxylase optisch be- 

 stimmen kann. Wir lösen Brenztraubensäure in m/10 Acetatpuffer von pH 5,3 zu 

 einer Konzentration von 1/200 molar, messen die Lichtabsorption bei 240 m/t 

 für eine Schichtdicke von 0,5 cm und geben dann Carboxylase zu der Lösung. 

 Dann verschwindet die Lichtabsorption in dem Maße, als die Brenztraubensäure zu 

 Acetaldehyd und Kohlensäure gespalten wird. Die Methode beruht auf der Tat- 

 sache, daß Brenztraubensäure bei pH 5,3 zwar nur zu einem kleinen Teil, aber 

 doch optisch noch ausreichend enolisiert ist. (ß mo iar = 6 • 10 5 cm 2 /Mole Brenz- 

 traubensäure). 



V. Vorbemerkung über die kristallisierten Fermente 



Die gut ausgearbeiteten Isolierungsverfahren von Gärungsfermenten sind ganz 

 einfache Verfahren. Das oxydierende Gärungsferment der Hefe, die Enolase der 

 Hefe, die Zymohexase des Muskels kann man heute grammweise mit einem 

 Arbeitsaufwand von nur einigen Tagen in reinem Zustand gewinnen; und man 

 kann die reinen Fermente, sofern sie von proteolytischen Fermenten völlig befreit 



