Über die Kristallisation von Gärungsfermenten und ihre optischen Teste 57 



Die Testreaktion ist zwar reversibel, aber sie verläuft, ihrem Zweck bei der Gärung 

 entsprechend fast vollständig in der Richtung der Hydrierung der Brenztrauben- 

 säure. Geht man von äquivalenten Mengen Brenztraubensäure und hydriertem 

 Pyridinnukleotid aus, so macht die Reaktion erst halt, wenn mehr als 99% der 

 Brenztraubensäure zu Milchsäure hydriert worden sind. Die Gleichgewichts- 

 konstante der Reaktion ist 6 x 10~ 5 bei 22° und neutraler Reaktion. 



Mit Hilfe des optischen Tests sind die Proteine der reduzierenden Gärungs- 

 fermente aus Muskeln und aus Tumoren der Ratte isoliert worden. Das Protein des 

 reduzierenden Gärungsferment aus Hefe, dessen Substrat Acetaldehyd ist, kann 

 Proteine, deren Substrat Brenztraubensäure ist, nicht ersetzen. 



9. Adenosintriphosphata.se 



Gibt man zu Phosphobrenztraubensäure eine kleine Menge Adenosindiphosphat 

 und das Protein des zweiten dephosphorylierenden Ferments, so wird eine kleine, 

 dem Adenosindiphosphat äquivalente Menge Phosphobrenztraubensäure dephos- 

 phoryliert, und es bildet sich eine kleine Menge Adenosintriphosphat. Fügt man 

 dann Adenosintriphosphatase hinzu, so wird das Triphosphat zu Diphosphat und 

 freier Phosphorsäure gespalten, und es kann neue Phosphobrenztraubensäure 

 dephosphoryliert werden, bis schließlich die gesamte Phosphobrenztraubensäure 

 in Brenztraubensäure und freie Phosphorsäure gespalten worden ist. 



Beobachten wir diese Vorgänge durch Absorptionsmessungen bei 240 mu, so 

 verschwindet zunächst, da nur wenig Phosphobrenztraubensäure verschwindet, 

 nur wenig Lichtabsorption. Nach Zusatz der Adenosintriphosphatase aber ver- 

 schwindet die gesamte von der Phosphobrenztraubensäure herrührende Licht- 

 absorption, und aus der Geschwindigkeit, mit der dies geschieht, kann man die 

 Wirksamkeit der Adenosintriphosphatase berechnen. 



Es sei hervorgehoben, daß hier, anders als bei Test 7, die Absorption des Adenins 

 des Adenosinphosphats nicht stört, da hier das Adenosinphosphat Katalysator 

 und seine Konzentration so klein ist, daß sie optisch zu vernachlässigen ist. 



10. Erstes phosphorylierendes Ferment 



Es bleiben noch die Reaktionen, die den Kreislauf des gebundenen Phosphats 

 schließen; die stufenweise Phosphorylierung der Hexose durch Adenosintriphos- 

 phat zu Hexose-6-Phosphat und Hexosediphosphat. Der optische Nachweis der bei- 

 den Reaktionen gelang uns bisher nur für Lebedewsaft, aber nicht für Muskelsaft. 



Die Komponenten des ersten Tests waren Glukose, Adenosintriphosphat, 

 Magnesiumsulfat und zwei gärungsfremde Substanzen, Triphospho-Pyridin- 

 nukleotid und ein Protein, das ich, ehe wir die Bindung der Kofermente an die 

 Proteine entdeckt hatten, „Zwischenferment" genannt habe. Es ist die Protein- 

 Komponente des Ferments, das 6-Phospho-Glukose zu 6-Phosphohexonsäure 

 oxydiert. 



Ohne das Protein des ersten phosphorylierenden Ferments ist der Test reak- 

 tionslos. Fügt man aber das Protein hinzu, so entsteht 6-Phospho-Glukose, die 

 sofort zu 6-Phosphohexonsäure oxydiert wird: 



Phospho-Glukose + Pyridinnukleotid + HoO = Phosphohexonsäure — Dihydropyridinnukleotid 



