56 Über die Kristallisation von Gärungsfermenten und ihre optischen Teste 



gestört, und Phosphobrenztraubensäure reagiert zu 2-Phosphoglycerinsäure zu- 

 rück, das heißt, es verschwindet Lichtabsorption bei 240 m/i. Aus der Geschwindig- 

 keit, mit der diese Absorption zurückgeht, kann man die Wirksamkeit der Mutase 

 berechnen. 



6. Enolase 8 



Gibt man zu einer Lösung von 2-Phosphoglycerinsäure und Magnesiumsulfat 

 Enolase-Protein, so entsteht Phosphobrenztraubensäure, die als Enolverbindung 

 bei 240 m// absorbiert. Aus der Geschwindigkeit, mit der diese Absorption zu- 

 nimmt, kann man die Wirksamkeit der Enolase berechnen. 



Dies ist der einfachste unsrer optischen Teste. Doch hat er den Nachteil der 

 Kurzwelligkeit. Bei 240 m// absorbieren die Nukleinsäuren, die Proteine und viele 

 andere Stoffe und der Betrag dieser Absorptionen ist in jedem Fall durch Messun- 

 gen zur Zeit Null zu bestimmen. Bei Testen, die auf der Dihydropyridin-Absorp- 

 tion beruhen, sind derartige Nullpunktmessungen überflüssig, da Lichtabsorp- 

 tionen im langwelligen ultraviolett bei 340 m// gegen die Dihydropyridin- Absorp- 

 tion fast immer zu vernachlässigen sind. 



7. Zweites dephosphorylierendes Ferment 



Das Ferment, das die Phosphobrenztraubensäure dephosphoryliert, kann man auf 

 zweierlei Art optisch bestimmen, bei 240 m// und bei 340 mu. 



Bei 240 m/i. Die Komponenten des Tests sind: Phosphobrenztraubensäure, 

 Magnesiumsulfat und Adenosindiphosphat. Gibt man das Protein des dephospho- 

 rylierenden Ferments hinzu, so verschwindet Phosphobrenztraubensäure, die voll- 

 ständig enolisiert ist, und an ihre Stelle tritt Brenztraubensäure, die bei neutraler 

 Reaktion nur zu einem kleinen Teil enolisiert ist. Es verschwindet also Licht- 

 absorption bei 240 m/t ; und aus der Geschwindigkeit, mit der dies geschieht, kann 

 man die Wirksamkeit des dephosphorylierenden Ferments berechnen. 



Bei dem Test stört der hohe Nullwert der Lichtabsorption, hervorgerufen durch 

 das Adenin des Adenosindiphosphats. Adenin absorbiert bei 240 m/u etwa doppelt 

 so stark wie Phosphobrenztraubensäure. 



Bei 340 m//. Die Komponenten des Tests sind: Phosphobrenztraubensäure, 

 Magnesiumsulfat, Adenosindiphosphat, Dihydropyridinnukleotid und Protein 

 des reduzierenden Gärungsferments. Dieses Gemisch ist reaktionslos. Fügt man 

 aber das Protein des dephosphorylierenden Ferments hinzu, so entsteht Brenz- 

 traubensäure, die sofort von dem reduzierenden Ferment zu Milchsäure hydriert 

 wird. Es verschwindet also Lichtabsorption bei 340 m//,und aus der Geschwindig- 

 keit, mit der dies geschieht, kann man die Wirksamkeit des dephosphorylierenden 

 Ferments berechnen. 



Mit Hilfe dieses Tests hat Negelein unter meiner Leitung das Protein des 

 zweiten dephosphorylierenden Ferments aus Hefe isoliert und kristallisiert. 



8. Reduzierendes Gärungsferment 9 



Brenztraubensäure und Dihydropyridinnukleotid sind die Komponenten des Tests, 

 bei dem hydriertes Pyridinnukleotid, also Lichtabsorption bei 340 m/t, verschwindet. 



