Über die Kristallisation von Gärungsfermenten und ihre optischen Teste 55 



Komplexbildner und außerdem Zinksulfat zusetzten; genug Zink, um die Hefe- 

 Zymohexase zu aktivieren, aber so wenig Zink, daß das oxydierende Ferment, das 

 bei diesem Test Hilfsferment ist, nicht geschädigt wurde. Die Spanne zwischen 

 aktivierender und vergiftender Konzentration des Zinks war dabei durchaus nicht, 

 wie man hätte befürchten können, eng; sondern lOmal soviel Zink, als zur Akti- 

 vierung der Zymohexase notwendig war, vergiftete das oxydierende Ferment nicht. 

 Doch ist bei der Verwendung von Cystein als Komplexbildner Vorsicht erfor- 

 derlich, weil Cystein mit 3-Phosphoglycerinaldehyd unter Bildung von Thioace- 

 talen oder Thiohalbacetalen reagiert. Trotzdem kann man beim Zymohexasetest 

 Cystein als Komplexbildner verwenden, da hier der 3-Phosphoglycerinaldehyd in 

 statu nascendi durch das oxydierende Ferment weggefangen wird; aber man könnte 

 Cystein beim Test des oxydierenden Gärungsferments nicht verwenden, weil hier 

 der Phosphoglycerinaldehyd, der hier zu den Komponenten des Tests gehört, 

 Zeit hätte, mit dem Cystein zu reagieren. 



4. Erstes dephosphorylierendes Ferment 



Wie beim Isomerase-Test erzeugt man zunächst das Gleichgewicht der Oxydations- 

 reaktion. Anders als beim Isomerase-Test setzt man dabei so wenig Phosphat zu, 

 daß nur wenig hydriertes Pyridinnukleotid, also nur wenig Lichtabsorption bei 

 340 mit entsteht. Entfernt man aber die 1,3-Diphosphoglycerinsäure aus der Lö- 

 sung, indem man sie zu 3-Phosphoglycerinsäure dephosphoryliert, so geht die 

 Oxydationsreaktion von links nach rechts weiter und es entsteht mehr hydriertes 

 Pyridinnukleotid, also mehr Lichtabsorption bei 340 m//. 



Die Komponenten des Tests sind demnach: 3-Phosphoglycerinaldehyd, Pyri- 

 dinnukleotid, Phosphat, Magnesiumsulfat und Adenosindiphosphat. Zunächst 

 setzt man das Protein des oxydierenden Gärungsferments zu und mißt die nun auf- 

 tretende Lichtabsorption bei 340 m/t. Hat man genug Protein zugesetzt, so wird 

 diese Absorption sehr schnell (in einigen Sekunden) konstant. Fügt man dann das 

 Protein des dephosphorylierenden Ferments zu, so nimmt die Lichtabsorption bei 

 340 m// zu, und aus der Geschwindigkeit dieser Zunahme kann man die Wirksam- 

 keit des dephosphorylierenden Ferments berechnen. 



Mit Hilfe dieses Tests ist das Protein des ersten dephosphorylierenden Ferments 

 unter meiner Leitung von Th. Bücher 73 aus Hefe isoliert und kristallisiert worden. 



5. Mutase 8 



Zu einer Lösung von 2-Phosphoglycerinsäure geben wir Magnesiumsulfat und 

 soviel Enolase-Protein, daß sich das Gleichgewicht der Reaktion 



2-Phosphoglycerinsäure ^ Phosphobrenztraubensäure + H^O 



schnell einstellt. Da die Phosphobrenztraubensäure (vergl. Test 6) bei 240 mu 

 absorbiert, so entsteht bei der Reaktion Lichtabsorption bei 240 m/i, die wir im 

 Gleichgewicht messen. 



Fügen wir dann Mutase zu der Lösung, so wird das Gleichgewicht durch die 



Reaktion 2-Phosphoglycerinsäure ü 3-Phosphoglycerinsäure 



