54 Über die Kristallisation von Gärungsfermenten und ihre optischen Teste 



der der Logarithmus der Lichtschwächung zunimmt, ist der Konzentration der 

 Zymohexase proportional. 



Das Gesagte gilt für Muskel-Zymohexase. Ist das zu bestimmende Ferment 

 Hefe-Zymohexase, so ist zu den Komponenten des Test noch Zinksulfat und Cy- 

 stein hinzuzufügen, wodurch eine sehr kleine, aber definierte Konzentration an 

 freiem Zinksalz erzeugt wird. 



2. Isomerase 6 



Zu einer Lösung von Phosphat, Phosphoglycerinaldehyd und Pyridinnukleotid 

 gibt man soviel Protein des oxydierenden Gärungsferments, daß sich das Gleich- 

 gewicht der Oxydationsreaktion 



Phosphat Phosphoglyce rinaldehyd Pyridinnukleotid 

 1,3-Diphosphoglycerinsäure Dihydropyridinnukleotid 



schnell einstellt. Da bei der Reaktion hydriertes Pyridinnukleotid entsteht, so ent- 

 steht Lichtabsorption bei 340 m//, die wir im Gleichgewicht messen. 



Geben wir dann Isomerase zu der Gleichgewichts-Lösung, so wird Phospho- 

 glycerinaldehyd zu Phosphodioxyaceton isomerisiert, das Gleichgewicht wird ge- 

 stört und es muß hydriertes Pyridinnukleotid zurückreagieren, also Lichtabsorption 

 bei 340 m// verschwinden, bis zur Einstellung eines neuen Gleichgewichts. Aus der 

 Geschwindigkeit, mit der das erste Gleichgewicht in das zweite Gleichgewicht 

 übergeht, kann man die Wirksamkeit der zugefügten Isomerase berechnen. 



3. Oxydierendes Gärungsferment 7 



Zum Nachweis und zur Messung des oxydierenden Gärungsferments benutzen 

 wir nicht die physiologische, sondern die irreversible Oxydationsreaktion, bei der 

 (bei Gegenwart von Arsensäure) 3-Phosphoglycerinaldehyd zu 3-Phosphoglycerin- 

 säure oxydiert wird. 



Es sind also die Komponenten des Tests 3-Phosphoglycerinaldehyd, Pyri- 

 dinnukleotid und Arsensäure. Gibt man das Protein des oxydierenden Ferments 

 hinzu, so beginnt die Reaktion und es entsteht Dihydropyridinnukleotid, also Licht- 

 absorption bei 340 rn.fi. 



Zu beachten ist bei dem Test, daß das oxydierende Gärungsferment durch sehr 

 kleine Mengen von Schwermetallsalzen geschädigt wird. Z. B. hemmen die kleinen 

 Mengen Kupfersalz, die im Blutserum normalerweise vorkommen, das Ferment 

 schon sehr erheblich. Es ist deshalb zweckmäßig, bei dem Test Komplexbildner 

 zuzusetzen, von denen sich Pyrophosphat besonders bewährt hat. Pyrophosphat 

 hemmt das Ferment nicht nur nicht, sondern es fördert die Wirkung durch Be- 

 seitigung hemmender Schwermetallsalze. 



Wenn aber das oxydierende Ferment bei den optischen Testen als Hilfsferment 

 zur Bestimmung anderer Fermente benutzt wird, so kann man wegen der Kom- 

 plexbildner in Schwierigkeiten geraten, zum Beispiel wenn die andern Fermente 

 zu ihrer Wirkung Magnesium oder Zink oder Eisen benötigen. Dann würde durch 

 den Komplexbildner das oxydierende Ferment zwar gefördert, aber die zu be- 

 stimmenden Fermente würden gehemmt. In dem Test zur Bestimmung der Hefe- 

 Zymohexase ist diese Schwierigkeit überwunden worden, indem wir Cystein als 



