50 Über die Kristallisation von Gärungsfermenten und ihre optischen Teste 



240 m;< Gärungsreaktionen, bei denen Phosphobrenztraubensäure entsteht oder 

 verschwindet, optisch messen kann. 



Zur Ausführung der optischen Teste benutzen wir Quarztröge von 3 cm 3 Inhalt, 

 deren planparallele Wände einen Abstand von 0,5 cm haben (Figur 1). Die Appa- 

 ratur besteht aus Wasserstoffrohr als Lichtquelle, Monochromator, Kalizelle mit 

 Argonfüllung und Fadenelektrometer oder bequemer, aber weniger vielseitig an- 

 wendbar: aus Quecksilberlampe, Monochromator, Sperrschichtzelle und Multi- 

 flexgalvanometer nach B. Lange. 



Wegen der Stärke der Banden braucht man für einen optischen Test nur wenig 

 Substanz, von Pyridinnukleotid etwa 1 Mikromol und von Phosphobrenztrauben- 

 säure etwa 3 Mikromole; und wegen der Genauigkeit der lichtelektrischen Meß- 

 methoden genügt es im allgemeinen, die Lichtschwächungen in 2 aufeinander- 

 folgenden Minuten abzulesen. Die Änderung des Logarithmus der Lichtschwä- 

 chung pro Minute, dividiert durch die Konzentration des Fermentproteins F, war 

 dann die relative Wirksamkeit W des Fermentproteins 



lln-^ 



w- i-.-i. 



Jt F 



Weitere Rechnungen waren nicht nötig, wenn der Test dazu dienen sollte, ein 

 Isolierungsverfahren für ein Ferment auszuarbeiten. 



Wenn aber für andere Zwecke aus den Lichtschwächungen die Konzentrationen 

 der lichtabsorbierenden Substanzen berechnet werden sollten, so wurden die 

 folgenden molaren Lichtabsorptionskoefficienten 



/^34o des Dihydropyridinnukleotids : 1,39 • 10 7 * 



cm'" 



/>24o der Phosphobrenztraubensäure (bei pH 7,4) : 4,0 • 10 3 

 in die Gleichung — = eß ■ c • d 



M.ole 



eingesetzt, in der c die Konzentration der lichtabsorbierenden Substanz in — r- 



bedeutet und d die Schichtdecke der Lösung in cm, die in auf i schwächt. 



Gemäß dieser Gleichung ist die Konzentration c der lichtabsorbierenden Sub- 

 stanz 



In* 



ß-d 

 IL Kinetik 



Wenn es auch für die Anwendung der Teste nicht notwendig war, so hat es sich 

 doch bei der Ausarbeitung der Teste ergeben, daß die Kinetik der Fermentreak- 

 tionen untersucht wurde. Die Ergebnisse sind wegen ihrer Einfachheit interessant. 

 Wir gehen dabei von zwei vereinfachenden Bedingungen aus : daß die Ferment- 

 proteine mit den Reaktionsteilnehmern — den prosthetischen Gruppen und den 

 Substraten — gesättigt sind; und daß die verschwindenden und die entstehenden 

 Stoffe gleich fest von den Fermentproteinen gebunden werden. Die erste Be- 



- cm- 



* Zusatz 1961. Wir rechnen heute mit ß 3 4o = 1,42 • 10" — — = 14,2 



Mole //Mole 



cm- 



