184 Über Gewinnung und Abbau des Cytohämins 



II. Hydrierung des Cytohämins 



Zur Hydrierung wurden 1,23 mg Cytohämin-chlorhydrat, in 0,05 ccm n/10-Natronlauge gelöst, 

 in den Hauptraum eines Kegelgefäßes gegeben, der 10 mg Platinschwarz und 2 ccm m/5-Borat- 

 puffer pH 11 enthielt. Das Cytohämin nahm in 280 Min. bei 20" 51 cmm H 2 auf; das sind 1,62 Mole 

 Ho, von denen x jz Mol H2 für die Reduktion des Eisens und etwa 1 Mol H-2 für die Reduktion 

 einer Doppelbindung verbraucht wurden. 



Wurde dieses hydrierte Cytohämin der Resorcinschmelze unterworfen, so konnte, 

 anders als bei der Resorcinschmelze des nicht hydrierten Cytohämins, kein kristalli- 

 siertes Reaktionsprodukt isoliert werden. Wahrscheinlich bleibt bei der Resorcin- 

 schmelze des hydrierten Hämins die lange Kohlenstoffkette mit dem Pyrrolkern 

 verbunden und verhindert dadurch die Kristallisation eines Deuterokörpers. 



III. Deutero-porphyrin aus Cytohämin 



Die Deuteroreaktion des nicht hydrierten Cytohämins, die wir 1953 beschrieben 

 haben, konnte vereinfacht werden und gelang jetzt in besserer Ausbeute nach 

 folgender Methode: 



100 mg Cytohämin-chlorhydrat wurden mit 500 mg Resorcin gemischt und 10 Min. bei 187— 

 190° geschmolzen. Die erkaltete Schmelze wurde in 20 ccm n/20-Natronlauge gelöst und mit 

 Wasser auf 40 ccm verdünnt. Mit 40 ccm n 10-Salzsäure wurde das Cyto-deutero-hämin gefällt. 

 Dieses Umfallen wurde 3mal wiederholt, wobei grün fluoreszierende Verunreinigungen entfernt 

 wurden. Dann wurde mit Wasser salzfrei gewaschen. Der noch feuchte Niederschlag wurde in 

 30 ccm Eisessig gelöst. Unter Durchleiten von Kohlensäure wurden 5 ccm einer frisch bereiteten 

 Eisen(II)-acetat-Eisessiglösung (0,32 g Ferrum reductum wurden in CO-2-Atmosphäre in 17 ccm 

 Eisessig durch Kochen unter Rückfluß gelöst) und dann auf dem siedenden Wasserbad 2 ccm konz. 

 Salzsäure hinzugefügt. Nach kurzem Erwärmen war alles Eisen abgespalten, und die Lösung zeigte 

 die dunkelrote Porphyrinfarbe. 



Die Lösung wurde in 250 ccm Wasser, welches 5 ccm konz. Salzsäure enthielt, eingegossen. 

 Das Cyto-deutero-porphyrin blieb in Lösung. Die ausgefallenen Verunreinigungen wurden durch 

 Filtrieren abgetrennt. Das Cyto-deutero-porphyrin wurde mit Natriumacetat ausgeflockt und der 

 Niederschlag mit \-n. Salzsäure extrahiert. Ungelöstes wurde verworfen. 



Aus der Lösung wurde das Cyto-deutero-porphyrin mit Natriumacetat aus- 

 gefällt. Es wurde abzentrifugiert, mit Wasser neutral gewaschen und getrocknet. 

 37 mg Cyto-deutero-porphyrin == 64,5% der Theorie. Die 1953 erhaltenen 

 Analysenwerte entsprachen der Zusammensetzung : 



C 69,80; H5,86; N 11,34. 



Cyto-deutero-porphyrin-dimethylester. 37 mg freies Porphyrin wurden in 12 ccm 1% HCl-haltigem 

 Methanol gelöst und bei 0° mit trockenem Salzsäuregas gesättigt. Nach lstdg. Stehen bei Raum- 

 temperatur wurde die Lösung bei 30° im Vakuum zur Trockene gebracht. Der Rückstand wurde 

 in 10 ccm Chloroform und 0,5 ccm Methanol gelöst, mit wasserfreiem Natriumcarbonat neutral 

 geschüttelt und nach Filtrieren im Vakuum zur Trockene gebracht. 



Chromatographische Reinigung. Der trockene Rückstand des Cyto-deutero-porphyrin-dimethyl- 

 esters wurde in 1 ccm Chloroform (für chromatographische Zwecke benötigtes Chloroform wurde 

 3mal mit je 2 Volumen Wasser gewaschen und über CaClsr— Na^SC^ getrocknet), dem 0,4 ccm 

 Benzol und 4 Tropfen Methanol zugesetzt wurden, in der Wärme gelöst. Die Lösung wurde auf 

 eine Al.0 3 -Säule Grad II 3 , 12 1,5 cm, gebracht. Dann wurde die Säule mit einem Gemisch 

 aus gleichen Teilen Chloroform und Benzol gewaschen, wobei der Cyto-deutero-porphyrin-ester 

 als einheitliche Zone durch die Säule wanderte und gefärbte Verunreinigungen zurückblieben. Das 

 Eluat wurde im Vakuum getrocknet. Die chromatographische Reinigung wurde in gleicher Weise 

 wiederholt, jedoch wurde der Ester dieses Mal ohne Zusatz von Methanol, in Chloroform: Benzol = 

 1:1, gelöst. Nach Eindampfen des Eluates wurde der Rückstand 2— 3mal aus Chloroform- 

 Methanol umkristallisiert. 



