Isolierung der Hefezymohexase und ihre Kristallisation als Quecksilbersalz 221 



tallsalzen und geben erst dann das Quecksilbersalz hinzu. Wie das Quecksilber aus 

 den kristallisierten Quecksilbersalzen der Enolase- und der reduzierenden Gä- 

 rungsfermente 3 , so kann auch das Quecksilber aus dem Hg-Salz der Hefezymo- 

 hexase durch Cystein sehr schnell entfernt und dann durch andere aktivierende 

 Metallsalze, wie Zinksulfat, ersetzt werden. Dieser Austausch von Quecksilber 

 gegen Zink geht in der Testlösung — die Cystein als Komponente enthält — so 



schnell, daß man im Test keinen Unterschied in 1 In -y- pro Minute findet, ob 



man die Hefezymohexase als Quecksilbersalz oder als freies Ferment zusetzt. 



Schließlich heben wir noch hervor, daß die durch Zinksulfat aktivierte Hefe- 

 zymohexase nahezu die gleiche katalytische Wirkung besitzt wie die ohne Metalle 

 wirkende Muskelzymohexase, wenn von beiden Zymohexasen die reinen Fermente 

 geprüft werden. 



Messung der Wirkung des Ferments 



Die Wirkung der Hefezymohexase wurde mit der optischen Methode gemessen, 

 nach der Vorschrift von 1942 1 : 



0,5 cm 3 w/10-K-Hexosediphosphat pH 7,4, 

 0,3 cm 3 Glykokoll 20 mg cm 3 , 

 0,6 cm 3 m 10-Cysteinchlorhydrat, 

 0,6 cm 3 n 10-NaOH, 

 0,1 cm 3 ZnS0 4 1,74 10 - molar, 

 0,1 cm 3 Pyridinnucleotid 6 mg cm 3 , 

 0,3 cm 3 Na-Arseniat 5,4proz., 

 2,35 cm 3 Wasser, 



0,1 cm 3 Oxydierendes Gärungs-Ferment 4,35 mg, cm 3 und zur Zeit Null etwa 0,( 

 prüfenden Zymohexase-Lösung. 



Wie schon 1948 hervorgehoben wurde 4 , reagiert Cystein, das eine Komponente 

 der Testlösung ist, mit Triosephosphat unter Bildung von Thiolverbindungen. 

 Beim optischen Zymohexasetest muß deshalb das oxydierende Ferment zuerst zu- 

 gesetzt werden, und erst dann darf die Spaltung des Hexosediphosphats durch Zu- 

 satz der Zymohexase in Gang gebracht werden. Dann nämlich hat das Triosephos- 

 phat keine Zeit, von dem Cystein abgefangen zu werden, sondern reagiert in statu 

 nascendi mit dem Nicotinsäureamid des Pyridinnucleotids. 



Das Maß der Zymohexase ist die Zunahme des natürlichen Logarithmus der 

 Lichtschwächung für die Wellenlänge 340 m/>, für die Schfchtdicke 1 cm, für die 

 Proteinkonzentration c = 1 mg/cm 3 pro Minute bei 20° : 



A In in I i. 

 W = . 



c - Min. 



Für die kristallisierte Muskelzymohexase fanden wir früher 1 W — 200. Für 

 die durch Zinksulfat aktivierte Hefezymohexase finden wir W ■■ 200—240. 



Auch die Konzentration des Ferment-Proteins wurde optisch bestimmt, indem 

 zunächst, nach der Vorschrift von 1943 2 , das Verhältnis der Lichtabsorptions- 

 Koeffizienten bei 280 m// und 260 mu gemessen wurde, 



0280 



" = ~~ß ' 



P260 



