222 Isolierung der Hefezymohexase und ihre Kristallisation als Quecksilbersalz 



Dann wurde der zu n gehörende Wert von />28o aus der Tabelle entnommen und 

 die Proteinkonzentration c mit Hilfe der Gleichung 



(In /o/O = ß 2 80 ' c • d 

 berechnet. 



Aceton-Trockenpulver 



3 kg Trockenhefe aus Unterhefe werden mit 9 / auf 38° erwärmter ra/15-Na2- 

 HPO_i-Lösung verrührt und 2 Stdn. bei 38° digeriert. Dann wird 1 Stde. zentri- 

 fugiert. Das Volumen des überstehenden Lebedewsaftes beträgt 3600 cm 3 . 



Der Lebedewsaft wird auf 0° abgekühlt und zunächst mit 1520 cm 3 kaltem Ace- 

 ton gefällt, wobei ein Niederschlag entsteht, der abzentrifugiert und verworfen 

 wird. Die überstehende Lösung wird mit 750 cm 3 kaltem Aceton weiter gefällt. 

 Der Niederschlag, der das Ferment enthält, wird abzentrifugiert und im Vakuum 

 bei 0° über Blaugel getrocknet. Auswaage: 103 g. Das trockene Pulver ist haltbar. 



Protaminfällung, Erhitzen 



40 g Acetontrockenpulver werden mit 800 cm 3 kaltem Wasser verrieben. Ohne zu 

 zentrifugieren werden 1200 mg Salmiridinsulfat, gelöst in 60 cm 3 Wasser, zuge- 

 geben. Dann wird zentrifugiert und das Sediment verworfen. Die überstehende 

 Lösung, deren Volumen 800 cm 3 beträgt, wird mit festem Ammonsulfat auf 0,4 

 Sättigung gebracht und dann 10 Min. auf 65° erhitzt. Nach Abkühlung auf Zim- 

 mertemperatur wird zentrifugiert und das Sediment verworfen. Die überstehende 

 Flüssigkeit, deren Volumen 800 cm 3 beträgt, wird mit festem Ammonsulfat auf 

 0,75 Sättigung gebracht; der Niederschlag, der das Ferment enthält, wird abzen- 

 trifugiert und kann unter Ammonsulfat aufbewahrt werden. 



Adsorption an Al(OH) 3 



Der Ammonsulfat-Niederschlag aus 80 g Aceton-Trockenpulver wird in 100 cm 3 

 «/IOO-NH3 bei 0°C gelöst. Wenig Ungelöstes wird bei 0° in der Spinco-Zentri- 

 fuge bei 40000 g abzentrifugiert und verworfen. Die überstehende Lösung, deren 

 Volumen 200 cm 3 beträgt, wird mit kaltem Wasser auf 2000 cm 3 verdünnt und 

 mit 250 cm 3 30volumproz. Al(OH) 3 versetzt. Das Al(OH) 3 , das 90% des Ferments 

 adsorbiert, wird abzentrifugiert und 2mal mit je 2000 cm 3 kaltem Wasser in der 

 Reibschale verrührt, wobei das Ferment adsorbiert bleibt. Dann wird zentrifugiert 

 und das Ferment von dem Al(OH)3 eluiert, indem man 3mal mit je 240 cm 3 kalter 

 0,3gesättigter Ammonsulfatlösung, die in bezug auf NH3 w/100 ist, verrührt und 

 zentrifugiert. Die Eluate sind nicht gleichwertig. Z, B. war für das erste Eluat die 

 Wirkung W =140, für das zweite Eluat W - 185 und für das dritte Eluat 

 W - 200. Man verwirft in diesem Fall das erste Eluat, vereinigt das zweite und 

 dritte, fällt mit festem Ammonsulfat bis zum Sättigungsgrad 0,77 und zentrifu- 

 giert den Niederschlag, der das Ferment enthält, auf der Spinco-Zentrifuge. 



